[發明專利]純化促卵泡激素的方法

在審

• 申請號: 202080089085.9
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN114867741A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 地晃宇;呂琇賓;薛三淑;樸津亨;方捐精
• 申請（專利權）人: 株式會社LG化學
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/18;C07K1/22
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;劉慧

本發明涉及一種以高得率和高純度純化促卵泡激素的方法。

技術領域

本發明涉及一種以高得率和高純度純化促卵泡激素的方法。

背景技術

可以用作各種治療劑的各種不同蛋白治療劑不僅已被應用于研究重組蛋白的制備，而且還應用于它們的臨床應用和商業化。

這些重組蛋白之一(即促卵泡激素(FSH))是一種由垂體前葉中的促性腺細胞產生，被釋放到血流中，并與黃體生成素(LH)一起作用以控制女性中的卵母細胞成熟和男性中的精子發生的激素。人類FSH被用于治療不排卵的女性，刺激多卵泡發育(超排卵)，以及輔助受孕(例如IVF、ICSI、GIFT和CIFT)的準備。此外，人類FSH用于在FSH產量低或不產生FSH的女性中刺激卵泡成熟，以及在患有少精子癥的男性中刺激精子發生。

由于FSH在治療生殖障礙中的重要性，因此對提供具有高純度和高比活性的重組FSH存在著需求。

FSH治療需要反復注射，高純度的FSH制劑可以皮下給藥，可以由患者自行給藥，從而能夠提高患者的便利性和依從性。

國際公開號WO 2006/051070 A1涉及一種純化FSH的方法，所述方法包括下述步驟：1)進行染料親和層析，2)進行疏水相互作用層析；和3)進行反相層析；還涉及一種純化FSH的方法，其包括下述步驟：1)進行陰離子交換層析，2)進行染料親和層析，3)進行疏水相互作用層析，4)進行反相層析，和5)進行陰離子交換層析。

國際公開號WO 2005/063811 A1涉及一種純化重組人類FSH的方法，所述方法包括下述步驟：1)進行離子交換層析；2)進行固定化金屬離子層析；和3)進行疏水相互作用層析(HIC)。

國際公開號WO 2007/065918 A2涉及一種純化FSH的方法，其包括下述步驟：進行染料親和層析；進行弱陰離子交換層析；進行疏水相互作用層析；和進行強陰離子交換層析；所述方法可以以任何順序執行。

因此，對用于純化重組FSH和FSH變體的新方法，存在著持續不斷的需求。具體來說，染料親和層析主要用于FSH純化的捕獲步驟。盡管染料親和層析的使用具有通過除去培養基中的培養基組分而在回收靶蛋白方面出色的優點，但它也具有除去源自于宿主細胞的雜質的能力下降的缺點。這些雜質多種多樣且非常復雜，因此無法確定為一種。因此，存在著靶蛋白的品質改變的高風險，而且這些改變也難以控制。另外，為了進一步除去大量雜質，在捕獲步驟后需要復雜的純化步驟，從而導致得率下降。

因此，本發明人努力開發一種以高純度和高得率獲得FSH的純化方法。結果他們發現，通過有效地安排純化過程的順序，可以提高過程操作效率，同時能夠提高得率并最大化雜質去除能力，從而完成了本發明。

發明內容

[技術問題]

本發明的目的是提供一種純化促卵泡激素(FSH)的方法。

[技術解決方案]

在下文中將更詳細地描述本發明。

同時，本發明中公開的相應描述和實施方式也可以應用于其他描述和實施方式。也就是說，本發明中公開的各種不同要素的所有組合均在本發明的范圍之內。此外，本發明的范圍不受下述具體描述的限制。

此外，本領域普通技術人員僅使用常規實驗即可識別或確認本申請中描述的本申請的特定方面的多個等效物。此外，此類等效物旨在包括在本申請中。

實施本發明的一個方面提供了一種以高得率和高純度純化促卵泡激素(FSH)的方法。

具體來說，所述純化方法可以是以下述順序進行的純化方法，其中所述方法包括：(a)進行免疫親和層析(IAC)；(b)進行疏水相互作用層析(HIC)；和(c)進行陰離子交換層析(AEX)。