[發(fā)明專利]用于無毒調(diào)理的組合物和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202080076279.5
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN114630904A
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·哈蒂根;T·博努德
• 申請（專利權(quán)）人: 比姆醫(yī)療股份有限公司
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N9/78;C12N15/10;C12N15/113
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種制造用于治療血紅蛋白病、血液癌癥或骨髓增生性疾病的造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞的方法，該方法包括：

(a)在所述造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞中表達(dá)核堿基編輯多肽，其中所述核堿基編輯多肽包含核酸可編程DNA結(jié)合蛋白(napDNAbp)和脫氨酶；以及

(b)使所述造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞與引導(dǎo)RNA接觸，該引導(dǎo)RNA為靶向編碼選自由CD117、CXCR4、CD135、CD90、CD45和CD34所組成的群組的細(xì)胞表面蛋白的核酸分子，并在所述細(xì)胞表面蛋白引入突變。

2.一種制造用于治療血紅蛋白病、血液癌癥或骨髓增生性疾病的造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞的方法，該方法包括

(a)在包含CD117蛋白質(zhì)的造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞中表達(dá)核堿基編輯多肽，其中所述核堿基編輯多肽包含核酸可編程DNA結(jié)合蛋白(napDNAbp)和脫氨酶；

(b)使所述造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞與引導(dǎo)RNA接觸，該引導(dǎo)RNA能夠靶向多核苷酸編碼的細(xì)胞表面蛋白，因此制造用于治療血紅蛋白病、血液癌癥或骨髓增生性疾病的所述造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述血紅蛋白病選自鐮狀細(xì)胞性貧血、地中海貧血、范可尼貧血、再生障礙性貧血和Wiskott-Aldrich綜合征所組成的群組。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述血液癌癥選自急性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤所組成的群組。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述骨髓增生性疾病是骨髓增生異常綜合征。

6.一種鑒定改變抗體與細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的突變的方法，該方法包括：

(a)在包含細(xì)胞表面蛋白的細(xì)胞中表達(dá)核堿基編輯多肽，其中，該核堿基編輯多肽包含核酸可編程DNA結(jié)合蛋白(napDNAbp)和脫氨酶；

(b)使所述細(xì)胞與能夠靶向所述編碼細(xì)胞表面蛋白的核酸分子的引導(dǎo)RNA接觸，并在所述細(xì)胞表面蛋白中引入突變；以及

(c)使所述細(xì)胞與特異性結(jié)合野生型細(xì)胞表面蛋白但表現(xiàn)出與包含突變的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合減少的抗體接觸，從而鑒定改變所述抗體與所述細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的突變。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包含測定所述細(xì)胞的生物活性。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其中，所述細(xì)胞表面蛋白選自由CD117、CXCR4、CD135、CD90、CD45和CD34所組成的群組。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或6述的方法，其中，所述細(xì)胞表面蛋白是CD117。

10.根據(jù)權(quán)利要9所述的方法，其中,該方法進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞與一個(gè)或者多個(gè)其他的引導(dǎo)RNAs接觸，所述引導(dǎo)RNAs為靶向選自由CXCR4,CD135,CD90,CD45，以及CD34所組成的群組中的細(xì)胞表面蛋白。

11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述細(xì)胞是造血干細(xì)胞或其祖細(xì)胞。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述突變是錯(cuò)義突變。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述錯(cuò)義突變不能改變所述細(xì)胞表面蛋白的生物活性。