[發明專利]干細胞用冷藏保存液

在審

• 申請號: 202080071870.1
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN114585255A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 相澤明;玄丞烋;玄優基
• 申請（專利權）人: 博傲沃德株式會社
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/0735;C12N5/10
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;劉春燕

本發明提供一種適合于以非冷凍狀態來冷藏保存人或動物的iPS細胞等干細胞或胚胎的冷藏保存液以及冷藏保存方法?；谝粋€實施方式的冷藏保存液，鈉離子種的量相對于鉀離子種的量的基于離子的摩爾比(Na⁺/K⁺的比)為0.5～1.3，以1～8mM的濃度含有Trolox或其類似物，以0.1～4.2mM的濃度含有腺嘌呤或其鹽或衍生物，含有全部的必需氨基酸，或含有除了1種、2種或3種以外必需氨基酸的全部的必需氨基酸，必需氨基酸的總含量為50～200mg，非必需氨基酸的總含量為50～200mg/L。

技術領域

本發明涉及一種用于以非冷凍狀態保存細胞、組織、類器官、臟器等的保存液。特別涉及一種用于以比室溫低的溫度，例如2～15℃、2～8℃或2～6℃進行保存的冷藏保存液。另外，特別是涉及一種用于使人iPS細胞等多能干細胞(pluripotent cells)以及其他干細胞(stemcells)、或由其得到的類器官等的衍生物、初期胚(初期胚胎)等懸浮或浸漬而進行保存的冷藏保存液。

背景技術

簡便、高效且穩定地保存/供給iPS、ES細胞等干細胞是再生醫療的基礎研究和臨床應用研究或藥物開發研究領域中不可或缺的重要技術。人的iPS細胞和ES細胞的冷凍保存具有以下諸多問題：若為緩慢冷凍保存法，則保存后的生存率較低，或者作為用于冷凍保存的耐凍材料的DMSO具有細胞毒性、分化誘導性等。細胞的非冷凍低溫保存作為從短期(例如一天～兩周)到中期(例如半個月～三個月)的保存法，是非常有魅力的技術，不僅如此，在考慮到分化誘導的細胞的保存、類器官的保存等再生醫療技術的產業化或在藥物開發中的應用的情況下，其優點很大。但是，使用作為臟器的低溫保存液而被廣泛使用的UW液(UW_sln；BELZERUW(注冊商標)COLDSTORAGE SOLUTION)，對含有人的iPS細胞的多能干細胞等進行低溫保存是很困難的，需要開發新的冷藏保存技術。

在肝臟、腎臟等移植中使用的臟器的冷藏保存中，廣泛了使用UW液，其成為實質上的黃金標準(最佳基準)。在20世紀80年代(1980年代)開發的UW溶液是一種由細胞內型的低Na離子和高K離子的鹽類組成構成的溶液，其中包括乳糖酸(Lactobionate)、棉子糖(Raffinose)、谷胱甘肽(Glutathion)、羥乙基淀粉(Hydroxy-ethylstarch)等的相對簡單的組成。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：PCT/JP2009/002941(JP5726525B)

專利文獻2：JP6220108B(JP2012-217342A)

專利文獻3：WO2016/076317A

非專利文獻

非專利文獻1：COMPARE BELZER UWTM COLD STORAGE SOLUTION TO VIASPANhttps://bridgetolife.com/compare-belzer-uw-cold-storage-solution-to-viaspan/

非專利文獻2：A novel efficient feeder-free culture system for thederivation of human induced pluripotent stem cells,Scientific Reports 4:3594doi:10.1038/srep03594

非專利文獻3：Cryopreservation and Hypothermal Storage of HematopoieticStem Cellshttps://etd.ohiolink.edu/！etd.send_file？accession＝ucin1439307244disposition＝inline