[發(fā)明專利]用于產(chǎn)生包封核酸的AAV中空顆粒的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202080061553.1 | 申請日： | 2020-07-02 |
| 公開（公告）號： | CN114269940A | 公開（公告）日： | 2022-04-01 |
| 發(fā)明（設計）人： | 岡田尚巳;峰野純一;蝶野英人 | 申請（專利權）人： | 學校法人日本醫(yī)科大學;寶生物工程株式會社 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N5/10 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 李志強;初明明 |
| 地址： | 日本*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 產(chǎn)生 核酸 aav 中空 顆粒 方法 | ||
1.一種用于產(chǎn)生包封核酸的腺相關病毒(AAV)空顆粒的方法，所述方法包括：
(1)制備線性核酸片段的步驟，所述線性核酸片段含有AAV反向末端重復序列(ITR)中的區(qū)域A序列和區(qū)域D'序列(AD序列)或AD序列的互補序列、以及目的基因序列，
(2)將步驟(1)中制備的核酸片段引入產(chǎn)生空AAV顆粒的細胞內的步驟，和
(3)培養(yǎng)步驟(2)中獲得的細胞的步驟。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述核酸片段按從5'端到3'端的次序含有AD序列或AD序列的互補序列、以及目的基因序列。
3.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述核酸片段按從5'端到3'端的次序含有目的基因序列、以及AD序列或AD序列的互補序列。
4. 根據(jù)權利要求1的方法，其中所述核酸片段不含AAV ITR中的區(qū)域A'的序列。
5.根據(jù)權利要求1的方法，其中制備核酸片段的步驟包括通過核酸擴增反應擴增核酸片段。
6.根據(jù)權利要求1的方法，其中產(chǎn)生空顆粒的細胞是AAV的Cap基因和Rep基因以及AAV的輔助功能已引入其內的細胞。
7.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述核酸片段為雙鏈核酸或單鏈核酸。
8.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述核酸片段中的AD序列的區(qū)域為雙鏈核酸，且所述核酸片段中的目的基因序列的區(qū)域為單鏈核酸。
9.一種線性核酸片段，其含有AAV反向末端重復序列(ITR)中的區(qū)域A序列和區(qū)域D'序列(AD序列)或AD序列的互補序列、以及目的基因序列。
10.根據(jù)權利要求9的核酸片段，其按從5'端到3'端的次序含有AD序列或AD序列的互補序列、以及目的基因序列。
11.根據(jù)權利要求9的核酸片段，其按從5'端到3'端的次序含有目的基因序列、以及AD序列或AD序列的互補序列。
12. 根據(jù)權利要求9的核酸片段，其不含AAV ITR中的區(qū)域A'的序列。
13.根據(jù)權利要求9的核酸片段，其為雙鏈核酸或單鏈核酸。
14.根據(jù)權利要求9的核酸片段，其中所述AD序列的區(qū)域為雙鏈核酸，并且所述目的基因序列的區(qū)域為單鏈核酸。
15.一種包封核酸的空AAV顆粒，其含有根據(jù)權利要求9至14中任一項的線性核酸片段。
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