[發明專利]使用FACS分離胎兒細胞

在審

• 申請號: 202080041987.5
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN114041053A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 博萊特·赫斯特貝克·尼古拉森;大衛·馬蒂亞斯·馬丁·雷丁·科爾瓦;英加·巴施·克里斯滕森;卡塔琳娜·拉文;林·達爾·杰佩森;洛特·哈特;帕爾·舍爾德·詹森;里普達曼·辛格
• 申請（專利權）人: 阿塞迪生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N33/50
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國

1.一種產前診斷方法，包括步驟：

1.提供懷有胎兒的婦女的血液樣品，

2.使所述血液樣品中包含的細胞與至少一種針對胎兒滋養層細胞標記物的磁性標記劑接觸，

3.用磁激活細胞分選法(MACS)富集所述樣品以獲得胎兒滋養層細胞，

4.使富集的細胞與選自以下各組的至少一種熒光標記劑接觸：

i.針對細胞核的熒光標記劑，

ii.針對母體細胞標記物的熒光標記劑，和

iii.針對胎兒滋養層細胞標記物的熒光標記劑

5.在熒光激活細胞分選儀(FACS)上對所述富集的樣品中的熒光標記細胞進行單細胞分選，基于：

i.所述針對胎兒滋養層細胞標記物的熒光標記劑的陽性選擇，

ii.所述針對細胞核的熒光標記劑的陽性選擇，和

iii.所述針對母體細胞標記物的熒光標記劑的陰性選擇

6.識別所述分選細胞中的胎兒滋養層細胞，包括通過從單個分選細胞獲得基因型，將胎兒起源分類器分配給各個分選細胞的步驟，和

7.診斷胎兒的表型。

2.一種產前診斷方法，包括步驟：

1.提供懷有胎兒的婦女的血液樣品，

2.使所述血液樣品中包含的細胞與選自以下各組的至少一種熒光標記劑接觸：

i.針對細胞核的熒光標記劑，

ii.針對母體細胞標記物的熒光標記劑，和

iii.針對胎兒滋養層細胞標記物的熒光標記劑

3.基于所述熒光標記劑的熒光，在熒光激活細胞分選儀(FACS)上富集所述樣品以獲得胎兒滋養層細胞，

4.在FACS上對所述富集的樣品中的熒光標記細胞進行單細胞分選，基于：

i.所述針對胎兒滋養層細胞標記物的熒光標記劑的陽性選擇，

ii.所述針對細胞核的熒光標記劑的陽性選擇，和

iii.所述針對母體細胞標記物的熒光標記劑的陰性選擇

5.識別所述分選細胞中的滋養層細胞，包括通過從所述胎兒滋養層細胞獲得基因型，將胎兒起源分類器分配給各個分選細胞的步驟，和

6.診斷胎兒的表型。

3.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述針對胎兒滋養層細胞標記物的磁性和/或熒光標記劑是針對內皮或上皮標記物的磁性和/或熒光標記劑。

4.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述針對胎兒滋養層細胞標記物的磁性和/或熒光標記劑是針對內皮標記物的磁性和/或熒光標記劑。

5.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述內皮標記物選自Thy-1CD90、血栓調節蛋白CD141、人內皮糖蛋白CD105、人波形蛋白(Vim)、血管細胞粘附分子(VCAM)、細胞間粘附分子1(ICAM)、血管內皮生長因子受體1(Flt-1)(VEGFR-1)，血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2)、血管內皮生長因子受體3(VEGFR-3)、纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)、內皮蛋白C受體(EPCR)、CD146、ITGA5、ITGB5、CDH11、CDH3和/或CD59。

6.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述內皮標記物是CD105、CD90和/或CD141。

7.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述內皮標記物是CD105和/或CD141。

8.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述針對胎兒滋養層細胞標記物的磁性和/或熒光標記劑是針對上皮標記物的磁性和/或熒光標記劑。

9.根據上述任一權利要求所述的方法，其中所述上皮標記物是細胞角蛋白。