[發(fā)明專(zhuān)利]產(chǎn)生骨骼肌干細(xì)胞和治療疾病的方法、組合物和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202080041325.8
• 申請(qǐng)日: 2020-04-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113923990A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·李;K·瓦格納;C·孫;I·Y·崔;H·T·林;P·安德森
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 約翰·霍普金斯大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01N63/00
• 分類(lèi)號(hào): A01N63/00;C12N5/071;C12N5/02;C12N5/00;G01N33/567
• 代理公司: 北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的群，其中，所述細(xì)胞的至少30％是于體外衍生自多能干細(xì)胞的PAX7+成肌祖細(xì)胞(MPCs)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的群，包含至少10,000個(gè)細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的群，其中，所述PAX7+MPCs表達(dá)CHRNA1(煙堿型膽堿能受體α1)、NTSR1(神經(jīng)降壓素受體1)或FZD1(卷曲受體1)中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的群，其中，所述PAX7+MPCs表達(dá)CHRNA1、NTSR1和FZD1中的至少兩種。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的群，其中，所述PAX7+MPCs表達(dá)CHRNA1、NTSR1和FZD1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的群，其中，所述PAX7+MPCs不表達(dá)FZD5(卷曲受體5)、GPR37(G蛋白偶聯(lián)受體37)或GPR27G(蛋白偶聯(lián)受體27)中的一種或多種。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的群，其中，所述PAX7+MPCs不表達(dá)FZD5、GPR37或GPR27中的任何一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的群，其中，所述PAX7+MPCs表達(dá)NCAM而不表達(dá)HNK1。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的群，其中，所述細(xì)胞的至少35％是PAX7+MPCs。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的群，其中，所述細(xì)胞的至少40％是PAX7+MPCs。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的群，其中，所述多能干細(xì)胞是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)或胚胎干細(xì)胞(ESC)。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的群，其中，所述細(xì)胞是人類(lèi)細(xì)胞。

13.一種于有此需要的患者中治療退行性肌肉萎縮疾病或病況的方法，包括向所述患者注射根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的群。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述退行性肌肉萎縮疾病或病況選自由肌營(yíng)養(yǎng)不良、肌病、線粒體疾病、軟組織肉瘤、離子通道疾病、惡病質(zhì)和肌少癥所組成的組。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述退行性肌肉萎縮疾病或病況是杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(DMD)。

16.一種產(chǎn)生成肌祖細(xì)胞(MPC)群的方法，所述方法包括：

在包含糖原合酶激酶3(GSK-3)的選擇性抑制劑的培養(yǎng)基中分化多個(gè)多能干細(xì)胞，以獲得經(jīng)分化的細(xì)胞；

以Notch信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑處理所述經(jīng)分化的細(xì)胞；和

以成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)擴(kuò)增所述經(jīng)分化的細(xì)胞，

從而獲得表達(dá)PAX7(配對(duì)盒蛋白)的MPCs的群。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，還包括富集所述MPCs。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，獲得的群包含至少30％的PAX7+MPCs。

19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述選擇性GSK-3抑制劑選自由CHIR99021、SB216763、SB415286、BIO及其組合所組成的組。

20.根據(jù)權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述Notch信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑是DAPT。

21.根據(jù)權(quán)利要求16至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述FGF是FGF-2和FGF-8。