[發明專利]從全血中擴增成體干細胞的方法

在審

• 申請號: 202080037624.4
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN113924361A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 馬科·波力提尼
• 申請（專利權）人: 善克思騰（股份）責任有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0789;A61K35/16
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

從血液中擴增成體干細胞的方法，包括對血液樣本的成體造血干細胞進行生長和去編程，所述方法是用基于PRP的血液衍生物產品對血液樣本進行體外處理，所述血液衍生物產品包括由相同自體血液樣本的一部分通過血小板裂解獲得的自體MCSF。

技術領域

這里描述的實施方案涉及一種從成年哺乳動物的全血，特別是，但不限于，從外周血中擴增成體干細胞的方法，以及在醫療領域的相應應用，特別是在人類或獸醫學中用于治療損傷、外部損傷、內部損傷、肌腱損傷、韌帶損傷、軟骨損傷、骨折，以及治療和或預防慢性和/或急性炎癥病變、神經系統和神經退行性病理學(病變)、心臟病理學、腫瘤病理學、自身免疫病理學、眼科病理學和遺傳性病變。

此處和之后的描述中，正如文獻中所已知的那樣，擴增指的是增加細胞數量的過程，可以是通過細胞分裂，也可以像此處描述和要求保護的具體方案那樣，通過去分化(de-differentiation)或去編程(de-programming)來增加細胞數量的過程，也就是說，血液中的一些細胞在適當的體外處理后重新轉變為干細胞的過程，如下文所述。

背景技術

近年來，干細胞在醫療中的使用已經獲得了廣泛的共識，但除了從血液中獲得的干細胞外，所獲得的治療效果遠遠低于預期。

事實上，許多已知的獲取干細胞的方法已被證明是耗時、費力、昂貴的，效果有限，有時還有副作用。

我們有胚胎干細胞和成體干細胞：前者來自8天的囊胚，另一方面，成體干細胞主要可以從骨髓、脂肪組織、肌肉組織、外周血和臍帶中獲得。

干細胞的定義一直在不斷演變。對于所有這些細胞，胚胎干細胞(ES)和成體干細胞，包括造血干細胞(HSC)和間(充)質干細胞(MSC)(Kuwana M.,et al.,2003)，已經識別出不同的遺傳標記，其中一些是許多細胞類型所共有的(Condomines M,et al.,2006；KangWJ,et al.,2006；Zhao Y.et al.,2003；Rabinovitch,M.et al.1976)。

另一方面，為了識別多能干細胞(Pluripotent Stem Cells，PSCs)，胚胎干細胞和成體干細胞，要考慮一些細胞內轉錄因子的表達(Sox2、Oct3/4和Nanog)。

最初，研究的方向是胚胎衍生的干細胞，因為它們是多能的，也是可以定性和定量的，因此適合進行實驗研究，但倫理問題，尤其是由于會產生禁忌癥腫瘤，導致它們被擱置。因此，如今成體干細胞是優選的。

來自另外個體的成體干細胞(同種異體)經常出現嚴重的排異現象，因為它們不被接受為自體。這主要影響到幾乎完全作為異體干細胞使用的臍帶干細胞。

誘導多能干細胞是通過病毒或不通過病毒，將胚胎干細胞的多能性因子轉移到成體干細胞的過程中產生，由于存在與胚胎干細胞類似的禁忌癥和高成本，因此不適合用于治療。

目前，在人類中，已經接受通過一種稱為“清血法(apheresis)”或白細胞單采術(leukapheresis)的過程從外周血中獲得干細胞。干細胞從血液中提取、收集，然后在化療或放療后立即接種到患有某些白血病的病人身上。這些干細胞是造血細胞，因此它們只與血液中的病變發生相互作用。

在持續6至8個小時的清血法中，從手臂靜脈或頸部或胸部的靜脈中抽取血液，并通過一臺機器分離干細胞。以這種方式純化的血液返回給病人，而收集的細胞則在液氮中冷藏保存(Condomines M，等，2006；Kang WJ，等，2006)。這種技術，不僅痛苦，而且對患者也非常有壓力。它提供了生長因子的體內接種，以刺激干細胞從骨髓釋放到血液中，無法真正區分/或純化循環中的干細胞。

現今，從監管的角度來看，這些細胞被允許用于治療專屬于血液的病癥。

現今被引入市場以治療不同病癥的干細胞是成體干細胞，主要是從骨髓和脂肪中獲得的間質干細胞。然而，它們有一些局限性：