[發明專利]從水溶液中去除去污劑的組合物和方法

在審

• 申請號: 202080033968.8
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN113840829A
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 法蘭克斯·馬克·鄧寧;沃德·C·塔克
• 申請（專利權）人: 拜奧麥迪遜股份有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K14/33;B01D15/34
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 馬叢

描述了通過添加濃度超過第二去污劑或表面活性劑臨界膠束濃度(CMC)的第二去污劑或表面活性劑來去除水溶液中第一去污劑或表面活性劑的組合物和方法。這些組合物和方法特別適用于含蛋白的溶液。典型的第一去污劑/表面活性劑包括聚山梨酯20、聚山梨酯80和TritonX?100。合適的第二去污劑或表面活性劑可以是離子型、非離子型或兩性離子型。典型的第二去污劑/表面活性劑包括但不限于半乳糖苷去污劑(例如辛基?β?半乳糖苷)、葡糖苷去污劑(例如MEGA8、MEGA9、MEGA10)、膽酰胺去污劑(例如CHAPS、CHAPSO、BIGCHAPS)和磺基甜菜堿去污劑(例如磺基甜菜堿3?10)。

本申請要求2019年3月14日提交的申請號為62/818,554的美國臨時專利申請的權益。這些以及所有其他引用的外部材料全部通過引用并入本文。如果通過引用并入的引用中術語的定義或用法與本文規定的術語定義不一致或相反，則以本文規定的術語定義為準。

技術領域

本發明的領域是去污劑或表面活性劑的去除，尤其是從藥物制劑中去除。

背景技術

以下描述包括可能有助于理解本發明的信息。這并不是承認本文提供的任何信息是現有技術或與當前要求保護的發明相關，也不是承認任何具體或隱含引用的出版物是現有技術。

輔料經常被添加到小分子(例如500D)和/或蛋白質溶液(如藥物制劑)中，以減少聚集，防止非特異性結合到容器表面，并以其他方式提高穩定性。傳統輔料包括蛋白質(如人或牛血清白蛋白、卵清蛋白、免疫球蛋白等)、糖和多糖以及可溶性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)。為了提供非免疫原性制劑，非離子和兩性離子去污劑和表面活性劑正越來越多地用于此目的。然而，許多去污劑和表面活性劑會干擾用于此類溶液表征和/或質量控制的分析方法(如免疫測定、基于肽報告的測定、基于細胞的測定、質譜等)。

遺憾的是，一旦引入去污劑和表面活性劑，就很難從溶液中去除。離子交換可用于去除帶電(如陽離子或陰離子)去污劑和表面活性劑，但許多常用表面活性劑不帶形式上的電荷。疏水性介質可結合大量去污劑和/或表面活性劑，然而，此類疏水性介質也可結合大量目標蛋白(可能以低濃度存在)。透析用于去除去污劑或表面活性劑，但僅部分成功，因為去污劑或表面活性劑與膠束的自締合減少了可通過透析去除的“溶劑化”表面活性劑或去污劑的量。因此，濃度梯度驅動透析去除去污劑和表面活性劑的速度非常緩慢。膠束的形成還干擾了通過更為活躍的基于尺寸的分離方法(如凝膠過濾和超濾)來去除表面活性劑和去污劑的工作，因為它們的尺寸會導致被超濾膜截留，并從凝膠過濾介質的內部體積中排除。

商用產品可用于去除水溶液中的表面活性劑和去污劑。例如，ThermoFisher公司的HiPPR樹脂聲稱可從低濃度蛋白/肽溶液中去除95％的表面活性劑或去污劑，同時保持蛋白/肽的含量。G Biosciences公司提供了一種去污樹脂，該樹脂被描述為對大多數表面活性劑具有高親和力，而對大多數蛋白和肽具有低親和力。Calbiochem公司提供了一種疏水性CALBIOSORB^TM樹脂，用于分批去除表面活性劑，并建議在透析緩沖液中使用該樹脂，以避免相關蛋白的非特異性結合。然而，目前尚不清楚這些產品是否能有效去除日益被用作輔料的聚山梨酯表面活性劑，或者在處理后所有蛋白/肽是否保留在溶液中。

在某些應用中，使用有機溶劑(如乙酸乙酯)提取肽溶液。在這種萃取中，相對疏水的去污劑轉移到萃取混合物的相對不溶性有機層。然而，由于存在不可逆變性的可能，此類方法通常會隨后對蛋白的物理性質進行表征(例如，通過質譜法)，而這可能無法提供有關活性的信息。

因此，仍然需要一種簡單方便的方法從水溶液中去除去污劑和/或表面活性劑，同時在溶液中保留功能蛋白和/或肽。

發明內容