[發明專利]利用蛋白酶活化受體介導的信號傳導途徑的活化來選擇具有高效產生細胞外囊泡的能力的干細胞的方法在審
| 申請號： | 202080032047.X | 申請日： | 2020-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN113767166A | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 張允實;樸元淳;成東慶 | 申請（專利權）人： | 社會福祉法人三星生命公益財團 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204 | 代理人： | 王達佐;洪欣 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 蛋白酶 活化 受體 信號 傳導 途徑 選擇 具有 高效 產生 細胞 外囊泡 能力 干細胞 方法 | ||
1.選擇具有高效產生細胞外囊泡的能力的干細胞的方法，所述方法包括測量蛋白酶活化受體(PAR)介導的信號傳導途徑的活化水平。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述PAR介導的信號傳導途徑的活化水平的測量包括以下過程：
(a)培養干細胞，然后用凝血酶處理所述干細胞；
(b)測量凝血酶處理的干細胞中選自以下的一種或多種的表達水平：Ras相關蛋白Rab-5(Rab-5)、早期內體抗原-1(EEA-1)、磷酸化細胞外信號調節激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)；以及
(c)選擇其中表達水平增加的干細胞作為具有高效產生細胞外囊泡的能力的干細胞。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述PAR是PAR1或PAR3。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述高效產生細胞外囊泡的能力是促進細胞外囊泡的產生或提升細胞外囊泡中蛋白質的水平。
5.如權利要求4所述的方法，其中所述蛋白質包括選自以下的一種或多種：血管內皮生長因子(VEGF)、肝細胞生長因子(HGF)、血管生成素和血管發生素-1。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述干細胞是胚胎干細胞或成體干細胞。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述成體干細胞包括選自以下的一種或多種：間充質干細胞、人組織來源的間充質基質細胞、人組織來源的間充質干細胞和多能干細胞。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述間充質干細胞來源于選自以下的一種或多種組織：臍帶、臍帶血、骨髓、脂肪、肌肉、皮膚、羊膜和胎盤。
9.如權利要求2所述的方法，其中所述凝血酶以1U/mL至10U/mL處理。
10.具有高效產生細胞外囊泡的能力的干細胞，所述干細胞通過權利要求1-9中任一項所述的方法選擇。
11.篩選用于促進干細胞的細胞外囊泡產生的誘導物的方法，所述方法包括以下過程：
(a)用候選物質處理干細胞；
(b)測量蛋白酶活化受體(PAR)介導的信號傳導途徑的活化水平；以及
(c)選擇增加了所述PAR介導的信號傳導途徑的活性的物質作為用于促進細胞外囊泡產生的誘導物。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述PAR介導的信號傳導途徑的活化水平的測量包括測量選自以下的一種或多種的表達水平：Ras相關蛋白Rab-5(Rab-5)、早期內體抗原-1(EEA-1)、磷酸化細胞外信號調節激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)。
13.如權利要求11所述的方法，其中所述干細胞是胚胎干細胞或成體干細胞。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述成體干細胞包括選自以下的一種或多種：間充質干細胞、人組織來源的間充質基質細胞、人組織來源的間充質干細胞和多能干細胞。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述間充質干細胞來源于選自以下的一種或多種組織：臍帶、臍帶血、骨髓、脂肪、肌肉、皮膚、羊膜和胎盤。
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