[發明專利]用于鑒定黑果越橘的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202080029311.4
• 申請日: 2020-04-06
• 公開（公告）號: CN113692446A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: V·隆戈;D·伯蘭達
• 申請（專利權）人: 因德納有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

本發明提供鑒定植物組合物中的黑果越橘的方法和專門設計用于該方法實施的試劑盒。本發明的方法基于使用PCR擴增對黑果越橘基因組區域中的核酸片段的檢測，其中所述基因組區域為內部轉錄間隔子1、5.8S核糖體RNA基因組區和內部轉錄間隔子2中的基因組區域。

技術領域

本發明提供了一種基于使用PCR擴增檢測特定基因組片段用于鑒定植物組合物中的黑果越橘(Vaccinium myrtillus)的方法。本發明還提供了專門設計用于實施本發明方法的試劑盒。

發明背景

植物提取物廣泛用于醫療、保健品、化妝品和食品工業。處理植物提取物時遇到的主要問題之一是不僅要確定其化學組成，還要確定其植物來源，以排除假冒風險。

用于確定植物材料的植物來源的基于遺傳的方法是本領域已知的(Parker,T,etal,Field-based species identification o fclosely-related plants using real-time nanopore sequencing.Sci Rep,2017.7(1):p.8345；Group,C.P.W.,A DNA barcodefor land plants.Proc Natl Acad Sci U S A,2009.106(31):p.12794-7；Fazekas,A.J.,et al.,DNA barcoding methods for land plants.Methods Mol Biol,2012.858:p.223)。此類方法基于植物材料中存在的DNA與公開可用數據庫中存在的已知DNA序列的比較。例如，WO 2006/020147(The Regents of the University of California)公開了一種用于鑒定存在于植物混合物中的單獨生物學遺傳成分的方法，所述方法基于基因組座位特異性PCR、單鏈構象多態性(SSCP)和序列分析的組合。據稱該方法能夠提供關于組合物的生物成分的信息，而無需事先了解可能存在哪些植物，并能夠檢測和識別混合物中可能存在的未知生物成分。

從植物樣品中遺傳鑒定植物的方法也公開于CN102146477,CN106119394,CN1372005,CN107142329,CN107653330,CN105624291,CN105603107,ES2176066,CN104673930,CN102222969,CN102732513,CN105063203,JP2007282626。在一些情況下，用于鑒定植物物種的方法基于PCR擴增檢測位于細胞核核糖體RNA編碼基因座中包含內部轉錄間隔子(ITS)區域ITS-1和/或ITS-2的特定序列。在一些情況下(CN1052429、CN105603107、ES2176066)，這些方法旨在識別含有植物材料的商業產品中的摻假。

Jaakola L等人，Food Chemistry vol.123,no.2(2010)pp.494-500，公開了通過DNA條形碼和HRM(高分辨率熔解)分析的組合方式，使用能夠對野生漿果進行物種特異性鑒定的設計引物對，鑒定商業上重要的漿果物種。黑果越橘使用引物ITSVm2f和ITSVm2r獲得位于ITS(內部轉錄間隔子)區域中的擴增子，并對該擴增子進行HRM分析來鑒定。

CN108642207公開了越桔植物等位基因圖譜的構建，以及利用引物特異性PCR擴增鑒定藍莓品種和相關物種的方法。

Marieschi M.等人，Food Chemistry vol.202(2016)pp.438-444公開了一種可用于多批次分析的、基于序列特征性擴增區域(SCAR)的方法，用于檢測黑果越橘和摻假物種的存在。

Koskima Ki JJ等人，European Journal of Plant Pathology,Kluwer AcademicPublishers-vol.125no.4(2009)pp.629-640公開，使用SYBR-綠作為熒光報告分子，通過實時PCR定量越橘基因的相對表達。