[發明專利]用于使非洲豬瘟病毒在胎豬肺泡巨噬細胞中生長的方法

在審

• 申請號: 202080001530.1
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN112492875A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: F·A·佐克曼;L·K·狄克遜;M·R·S·葡萄牙;L·C·高雷
• 申請（專利權）人: 艾普特沐恩生物股份有限公司;伊利諾伊大學評議會
• 主分類號: A61K39/187
• 分類號: A61K39/187;C12N7/00;A61P31/20
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;韓文華

1.一種用于產生非洲豬瘟(ASF)病毒子代的方法，所述方法包括:

提供能夠使ASF病毒復制的分離或純化的胎豬肺泡巨噬細胞，其中所述細胞被培養至少5代；

將細胞暴露于ASF病毒；以及

使ASF病毒在細胞中復制；

從而產生ASF病毒子代。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述細胞為ZMAC細胞或其衍生物。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述細胞選自ZMAC-1、ZMAC-4、具有美國典型培養物保藏中心指定的ATCC專利保藏編號PTA-8764的保藏細胞、和前述任一者的衍生物。

4.根據權利要求1所述的方法，所述方法進一步包括使細胞與生長因子組合物接觸。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述生長因子組合物包含巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)或粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述細胞獲自胎齡為約30天至約90天的豬胎受試者。

7.一種用于制備ASF疫苗的方法，所述方法包括：

提供ASF病毒的經修飾活病毒(MLV)株；以及

使MLV株在分離或純化的胎豬肺泡巨噬細胞中生長，所述胎豬肺泡巨噬細胞能夠使ASFMLV株復制。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述細胞為原代細胞、細胞群、細胞系、或者其變體或衍生物。

9.根據權利要求7所述的方法，其中，所述細胞為ZMAC細胞或其衍生物。

10.根據權利要求7所述的方法，其中，所述細胞選自ZMAC-1、ZMAC-4、具有美國典型培養物保藏中心指定的ATCC專利保藏編號PTA-8764的保藏細胞、和前述任一者的衍生物。

11.根據權利要求7所述的方法，所述方法進一步包括使細胞與生長因子組合物接觸。

12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述生長因子組合物包含巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)或粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)。

13.根據權利要求7所述的方法，其中，所述細胞獲自胎齡為約30天至約90天的豬胎受試者。

14.一種用于使ASF病毒生長的方法，所述方法包括：

從豬胎肺分離胎豬肺泡巨噬細胞，包括：提供豬胎受試者，從所述受試者獲得包含細胞的支氣管肺泡灌洗樣品，以及從所述樣品中分離巨噬細胞；

培養細胞；以及

使細胞與ASF病毒接觸，以使病毒復制；

從而使ASF病毒生長。

15.根據權利要求14所述的方法，其中，培養包括使細胞傳代至少5代、或進行至少10天的連續培養來使細胞生長、或它們的組合。

16.根據權利要求14所述的方法，其中，培養包括使細胞與生長因子組合物接觸。

17.根據權利要求16所述的方法，其中，所述生長因子組合物包含巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)或粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)。

18.根據權利要求14所述的方法，其中，所述細胞獲自胎齡為約30天至約90天的豬胎受試者。

19.根據權利要求1所述的方法，其中，所述細胞被培養至少10代。