[實用新型]雞ALKBH5基因熒光定量RT-PCR試劑盒

有效

• 申請號: 202021052140.0
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN212688095U
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 姬改革;束婧婷;單艷菊;章明;劉一帆;巨曉軍;屠云潔;盛中偉;鄒劍敏
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12M1/34
• 代理公司: 揚州潤中專利代理事務所(普通合伙) 32315
• 代理人: 李楠

本實用新型屬于生物技術領域，具體公開了一種雞ALKBH5基因熒光定量RT?PCR試劑盒，包括盒體、蓋體，盒體內設有SYBR Green Master熱啟動熒光PCR混合物、雞ALKBH5基因表達的特異性正反向引物、雞內參基因GAPDH表達的特異性正反向引物、ROX染料、滅菌DEPC水、Dilution buffer。本實用新型試劑盒通過實時熒光定量RT?PCR技術檢測雞ALKBH5基因表達。

技術領域

本實用新型屬于生物技術領域，尤其涉及雞ALKBH5基因表達熒光定量RT-PCR試劑盒及檢測方法，主要用于雞ALKBH5基因在肌肉和肝臟代謝、生長、分化中的作用機理研究。

背景技術

表觀遺傳學是指在基因序列不發生變化的情況下，基因的表達水平發生改變，如DNA、 RNA和蛋白質的化學修飾都是表觀遺傳學重要的研究內容，近年來，隨著科學技術的快速發展，基于DNA和蛋白質修飾研究基礎，RNA甲基化研究在表觀遺傳領域已成為前沿的研究熱點。在眾多的RNA化學修飾中，RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60％以上，其中N-甲基腺嘌呤(N6－methyladenosine，m6A)是真核生物mRNA和lncRNAs最常見轉錄后修飾，近年來以m6 A為主的RNA甲基化修飾研究表明，m6A與基因表達調控以及RNA 的轉錄、翻譯、剪切、降解、核轉運等方面密切相關。m6A甲基化的形成需借助甲基化轉移酶的作用將甲基供體SAM提供的－CH3轉移到RNA分子特定的腺嘌呤上，去甲基化需要去甲基化酶和結合蛋白質的作用脫去－CH3而實現。m6A甲基化修飾在細胞內是動態的可逆的修飾過程。

ALKBH5基因主要參與m6A甲基化修飾的去甲基化過程。研究發現，ALKBH5基因在小鼠睪丸中的表達水平最高，敲除后會導致m6A水平上升，導致精子形態發生異常，睪丸體積變小以及一系列的生殖功能障。在小鼠小腦發育過程中，Alkbh5基因的缺失會導致不同細胞中的關鍵基因m6A修飾發生紊亂，導致小腦細胞增殖和分化異常。在膠質母細胞瘤干樣細胞(GSCs)中，沉默ALKBH5的表達可抑制GSCs的增殖。在人上皮性卵巢癌組織中ALKBH5 的表達與正常卵巢組織相比，顯著增加。以上的這些研究，大多數是以人或小鼠為模型，共同揭示了ALKBH5在調控動物繁殖、組織生長發育中具有重要作用，在一些重要的經濟動物，如雞上的研究均相對較少。在現代規模化養殖生產中，提高動物的生產性能和繁殖性能對于提高經濟效益極為重要，因此就可以從RNA甲基化修飾的分子調控機制研究入手，進而通過有效的改變RNA分子甲基化修飾的水平來影響雞的生產性能，產生更多的經濟效益。

實用新型內容

為了解決以上技術問題，本實用新型提供一種雞ALKBH5基因表達熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，本實用新型試劑盒通過實時熒光定量RT-PCR技術檢測雞ALKBH5基因表達，為研究雞ALKBH5表達調控以及生長發育調控奠定基礎，為優質雞育種提供理論依據，具有潛在的應用價值。

本實用新型的目的是通過以下技術方案實現的，雞ALKBH5基因熒光定量RT-PCR試劑盒，包括盒體和蓋體，盒體內設有襯墊，襯墊上設有容納腔，其特征是，所述容納腔中分別設置SYBR Green Master熱啟動熒光PCR混合物、雞ALKBH5基因表達的特異性正反向引物、雞內參基因GAPDH表達的特異性正反向引物、ROX染料、滅菌DEPC水、稀釋緩沖液 Dilutionbuffer。

其中，雞ALKBH5基因正反向引物序列為：

F:5，—TCGTTCTTCAGCGATTCGGC—3，

R:5，—TCGGCTGCGTATCCACTGAG—3；

以及雞內參基因GAPDH表達的特異性正反向引物序列為:

F:5，—CGATCTGAACTACATGGTTTAC—3，

R:5,—TCTGCCCATTTGATGTTGC—3。