[實用新型]豬流行性腹瀉病毒IgA和IgG抗體檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202020545502.3
• 申請日: 2020-04-15
• 公開（公告）號: CN212159821U
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發(fā)明（設計）人: 查銀河;舒建洪;楊芳;黃磊;劉影;舒金琪
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學紹興生物醫(yī)藥研究院有限公司;浙江理工大學;杭州洪橋中科基因技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本實用新型提供了一種豬流行性腹瀉病毒IgA和IgG抗體檢測試劑盒，所述的試劑盒有一個盒體(1)，盒體(1)內設有抗原包被板存放槽(2)、樣品稀釋板存放槽(3)、陽性對照液孔槽(4)、陰性對照液孔槽(5)、羊抗豬IgG酶標抗體孔槽(6)、羊抗豬IgA酶標抗體孔槽(7)、濃縮洗滌液孔槽(8)、樣品稀釋液孔槽(9)、顯色液孔槽(10)、終止液孔槽(11)和操作說明書存放槽(12)；抗原包被反應板存放槽(2)內放置抗原包被反應板，樣品稀釋板存放槽(3)內放置樣品稀釋板，各孔槽中(4?11)放置裝有相應溶液的試劑瓶，操作說明書存放槽(12)內放置操作說明書。本試劑盒能夠在僅僅增加一個試劑的情況下實現(xiàn)同時檢測PEDV的IgG抗體和IgA抗體；且檢測的抗體滴度都在酶標儀的檢測范圍之內，利于對整體抗體效價的評價。

技術領域

本實用新型屬于病毒疫病診斷技術和動物檢疫領域，具體涉及一種檢測豬流行性腹瀉病毒IgA和IgG抗體檢測試劑盒。

背景技術

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus， PEDV)引起的，以腹瀉、嘔吐、脫水和對哺乳仔豬高致死率為主要特征的一種高度接觸性腸道傳染病。截止到2017年，PED已蔓延到全世界大多數(shù)養(yǎng)豬國家，成為世界范圍內養(yǎng)豬業(yè)共同關注并亟需解決的問題。當前，對PEDV的臨床診斷方法主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，檢測抗原或特異性抗體，以評估豬場的PEDV的感染情況。

PEDV屬于冠狀病毒科(Coronaviridae)，冠狀病毒屬(Coronavirus)。病毒粒子為多型性，傾向球狀，平均直徑約為130nm。病毒結構蛋白包括：核衣殼蛋白(N)，纖突糖蛋白(S)、膜蛋白(M)、小膜蛋白(E)，其中S蛋白最大。S蛋白為伸出PEDV包膜的20nm球桿形糖蛋白，分子量為180～220kDa，預測有1,383個氨基酸殘基組成，富含半胱氨酸，并含有29個潛在N-糖基化位點，pH4.0條件下，溶解度最大。S蛋白中N-糖基化位點在病毒粒子成熟后不能被細胞蛋白酶切割，直接導致病毒的細胞融合力和感染力降低，是PEDV人工細胞培養(yǎng)增殖困難的原因。根據(jù)與其它冠狀病毒S蛋白保守序列的相似性，PEDV S蛋白被劃分為S1(aa 1～789)和S2(aa 790～1383)兩個結構域。其中S1區(qū)位于病毒表面，主要識別受體并與宿主細胞受體結合，介導中和抗體產(chǎn)生。S2區(qū)負責病毒囊膜與宿主細胞膜的融合，將病毒遺傳物質RNA 導入宿主細胞內，從而引起細胞感染。因此，選擇S1蛋白作為試劑盒開發(fā)的抗原蛋白最為合適。

現(xiàn)有技術認為，針對PEDV的ELISA檢測應針對IgA抗體，因為其為粘膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體，也是對阻斷病毒感染起到重要作用的抗體。但是，僅僅檢測IgA抗體對整體的免疫進行評價，不夠全面，因為，我們的臨床檢測表明，IgA抗體和IgG抗體并沒有明顯的相關性，因此，為了便于更好的評價PEDV 臨床免疫或感染狀況，可能需要同時檢測PEDV IgG抗體和PEDV IgA抗體。另外，本申請人在進行試劑盒開發(fā)過程中發(fā)現(xiàn)，免疫后的血清中抗體滴度很高，使用OD450檢測時很容易超出儀器檢測上限(如專利號為201710704142.X的發(fā)明專利提出的ELISA檢測試劑盒，為了達到降低OD450值，使用很低的抗原包被濃度來建立試劑盒，但本申請人使用同樣的抗原蛋白重復試驗時，發(fā)現(xiàn)不同時間、不同人、不同批次重復性很差，不利于試劑盒的保存和推廣)，不利于整個抗體效價的評價。基于此，特提出了本申請。

實用新型內容

為了彌補現(xiàn)有技術的不足，本實用新型的目的在于提供一種豬流行性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒；優(yōu)選地的豬流行性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒能夠同時檢測PEDV-IgG抗體和PEDV-IgA抗體。