[發(fā)明專利]N-末端腦鈉肽前體多肽、抗體及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011644512.3
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112759639A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易維京;姬成東;吳春容;溫雅雯;張鶴銘;湯定斌
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶中元匯吉生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/58
• 分類號: C07K14/58;C07K16/26;G01N33/74;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543
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本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及N?末端腦鈉肽前體多肽、抗體及試劑盒，可以特異性的識別N?末端腦鈉肽前體，本發(fā)明的抗體可以應(yīng)用到多種方法學(xué)中，實(shí)現(xiàn)對N?末端腦鈉肽前體的高靈敏度、高特異性檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及N-末端腦鈉肽前體多肽、抗體及試劑盒

背景技術(shù)

N-末端腦利鈉肽(N-terminal fragment of the BNP precursor，NT-proBNP)是目前廣泛使用的心衰檢測標(biāo)記物，已被廣泛應(yīng)用于心力衰竭的早期診斷、心衰的危險(xiǎn)等級劃分，肺源性和心源性呼吸困難的鑒別，心衰的高危人群篩選，指導(dǎo)心衰的治療以及預(yù)后等方面。血液中的NT-proBNP來源于腦鈉肽前體(proBNP)，經(jīng)酶切形成。目前主要采用基于免疫的方法檢測病人血液中的NT-proBNP含量。即采用特異性識別NT-proBNP的抗體組合來實(shí)現(xiàn)對NT-proBNP的捕獲以及定量讀值。因此好的抗體是開發(fā)優(yōu)質(zhì)NT-proBNP診斷試劑的關(guān)鍵。目前國內(nèi)有眾多廠家開發(fā)出了NT-proBNP的診斷試劑盒，但具有優(yōu)質(zhì)性能的檢測試劑多是依賴于進(jìn)口的抗體原料、價(jià)格高昂。因此，開發(fā)出成本低廉且具有優(yōu)秀臨床表現(xiàn)的NT-proBNP抗體原料十分必要。

目前國內(nèi)有一些嘗試開發(fā)NT-proBNP抗體的報(bào)道，但用于臨床檢測時(shí)，檢測靈敏度、臨床吻合度等性質(zhì)仍舊不及進(jìn)口抗體。研究表明人體血液循環(huán)中的proBNP以及NT-proBNP蛋白存在異質(zhì)性的糖基化修飾。目前對于proBNP以及NT-proBNP上糖基化修飾的生物學(xué)功能和生理意義的認(rèn)識還非常有限。但這些糖基化修飾無疑會(huì)對臨床檢驗(yàn)中抗體的選擇和檢測效果有重要影響。一方面，在開發(fā)相關(guān)抗體時(shí)，大多采用合成的線性多肽進(jìn)行動(dòng)物免疫，因此所開發(fā)的抗體能識別不被糖基化修飾的相關(guān)表位，但人體血液中NT-proBNP上的O-糖基化修飾卻有可能導(dǎo)致抗體識別的失敗，從而影響檢測質(zhì)量。另一方面，NT-proBNP來源于對proBNP的酶切加工處理，糖基化修飾也會(huì)對該加工過程產(chǎn)生影響。因此，抗體識別位點(diǎn)的不同，會(huì)導(dǎo)致抗體對NT-proBNP和proBNP區(qū)分能力的差異，進(jìn)而導(dǎo)致最終檢測結(jié)果的差異。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上認(rèn)識，本發(fā)明開發(fā)了四株抗體組合：Ab21、Ab22、Ab23或Ab25，能夠?qū)崿F(xiàn)NT-proBNP的特異性檢測，提高檢測靈敏度和親和力。

本發(fā)明一方面提供氨基末端腦鈉肽前體(NT-ProBNP)多肽，其特征在于，所述氨基酸序列為SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

本發(fā)明另一方面提供抗NT-ProBNP單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其特征在于，所述NT-ProBNP單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分采用上述多肽與載體蛋白偶聯(lián)形成的重組蛋白經(jīng)動(dòng)物免疫形成。

另一方面，本發(fā)明公開了抗NT-ProBNP單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，所述的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分與NT-ProBNP的13-27號、27-31號或42-46號氨基酸區(qū)域特異性結(jié)合。在所述氨基酸區(qū)域結(jié)合的抗體與NT-proBNP或者proBNP的結(jié)合不受蛋白糖基化修飾水平的影響。

優(yōu)選地，所述的抗NT-ProBNP單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分包含：

a)如SEQ ID NO.5所列的重鏈可變區(qū)CDR1；

b)如SEQ ID NO.6所列的重鏈可變區(qū)CDR2；

c)如SEQ ID NO.7所列的重鏈可變區(qū)CDR3；

d)如SEQ ID NO.8所列的輕鏈可變區(qū)CDR1；

e)如SEQ ID NO.9所列的輕鏈可變區(qū)CDR2；

f)如SEQ ID NO.10所列的輕鏈可變區(qū)CDR3；

上述抗NT-ProBNP單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，命名為Ab21