[發明專利]一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法

在審

• 申請號: 202011644007.9
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114686512A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 邢少辰;王云鵬;韋正乙;蔡玉紅;范杰英
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 郭智

1.一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法，其特征在于，包括以下步驟；

步驟一：選取外植體材料，玉米成熟種子幼苗莖節，將其置于70％濃度乙醚中，清洗2-3遍，然后在無菌環境下，通過器械在幼苗莖節上劃上與莖節紋理垂直的傷口；

步驟二：將處理完成后的幼苗莖節放置在培養皿中，保持環境溫度在20-28℃，在黑暗環境下靜置2-3天，幼苗莖節傷口處出現愈傷組織；

步驟三：對幼苗莖節進行挑選，觀察表面是否出現破損，莖節培養是否正常，將其放置在培養基中，培養基底層墊一層試紙，將攜帶有目的基因載體的農桿菌置入其中，與幼苗莖節共培養3-5天；

步驟四：將幼苗莖節取出置入篩選培養基中，篩選12d，重復篩選5-8次；

步驟五：將幼苗莖節從篩選培養基取出，置于培養基中并在室溫昏暗環境下培養10-12天，有新芽萌動后，轉到基礎培養基中，在室溫和12h光照條件下，分化出芽。

2.根據權利要求1所述的一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法，其特征在于，所述步驟一中幼苗莖節上傷口大小控制在1-3mm。

3.根據權利要求1所述的一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法，其特征在于，所述步驟三中幼苗莖節傷口處緊挨試紙放置。

4.根據權利要求1所述的一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法，其特征在于，所述步驟四中篩選培養基包括終濃度為3-5mg/L的草丁膦和終濃度為160-175mg/L的特美汀。

5.根據權利要求1所述的一種玉米自交系成熟種子幼苗莖節遺傳轉化直接成苗的方法，其特征在于，所述步驟三中培養基成分包括MS基本培養基+15g/L葡萄糖+15g/L麥芽糖+0.2g/L脯氨酸+0.6g/L水解酪蛋白+2～5mg/L噻二唑苯基脲+0.5～1mg/L 2,4-D，瓊脂6.5g/L。