[發明專利]一種腫瘤組織保存液及應用

有效

• 申請號: 202011641294.8
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112586495B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 萬勇;徐中華;李明
• 申請（專利權）人: 廣州市達瑞生物技術股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明公開了一種腫瘤組織保存液及應用，本發明所述的原代腫瘤組織保存液不含血清，成分明確，批間差異小。BSA、海藻糖、γ?多聚谷氨酸、亞油酸等組分聯合使用，協同增效，可有效克服長時間運輸保存條件下所帶來的細胞酸中毒、水腫以及外部物理應力，從而減少細胞損傷，維持組織形態結構和細胞活力，隨著保存時間的延長，癌組織的細胞活力下降減緩，保存后的細胞膠滴包埋培養成功率高，能夠滿足腫瘤組織更長時間保存運輸的需求。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種腫瘤組織保存液及應用。

背景技術

隨著再生醫學以及干細胞研究的發展，活體腫瘤組織的科研和臨床應用價值日益凸顯。臨床新鮮腫瘤組織標本離體后的采集和保存對于標本的質量至關重要，直接影響后期研究的可靠性。在組織樣本的采集、運輸過程中，選擇合適的保存介質可維持組織結構形態及細胞的活性，反之，保存不當則可能導致組織細胞凋亡。

通常，在2～8℃低溫條件下將腫瘤組織保存在適當的保存液中進行運輸，以降低細胞內的酶活性，從而降低細胞新陳代謝速率，延緩組織自溶速度，延長組織內細胞離體后的存活時間。一般情況下，人們大多常采用含血清的完全培養基作為腫瘤組織體外保存液，用于組織的短時間保存。不過，由于完全培養基是特定的培養條件和溫度下使用，更適用于細胞的生長和增殖，而這與組織保存的目的并不完全相同。特別是在臨床上需要長時間保存運輸樣本時，細胞完全培養基無法滿足要求，而且血清成分復雜，存在不同品牌、批次之間的差異，血清中的未知生長因子可能對干細胞產生不可預知的誘導分化，這些可能對后續臨床應用研究產生不可估計的影響。因此，臨床上需要從離體組織保存運輸的實際需要出發，開發一種適用于密閉條件下的長時間低溫保存運輸用保存液。

理想的組織保存液應滿足以下幾點：(1)具有不依賴CO₂條件的、穩定的酸堿緩沖系統，防止細胞酸中毒引發細胞凋亡。長時間密閉保存容易造成離體組織中細胞缺氧，將促進組織進行無氧條件下糖酵解，乳酸濃度增加，組織酸化引發溶酶體的不穩定，致使細胞發生程序性凋亡。(2)提供必要的營養物質，滿足組織細胞基本新陳代謝需要，以達到長時間維持細胞活性的目的。(3)防止低溫條件下的細胞水腫對組織細胞造成的不可逆損傷。低溫條件下，組織中活細胞代謝速度降低，能量生成不足，可能導致維持細胞滲透壓的Na⁺-K⁺泵運轉失靈，細胞內滲透壓增高，引起細胞水腫。(4)能夠緩沖運輸過程中的物理應力，減輕其對組織細胞產生的機械損傷。樣本在運輸過程中的物理應力，如剪切力、沉降、機械沖擊、振動等，易對組織細胞產生機械損傷，保持保存液一定的黏度，可有助于緩沖機械應力，降低細胞受到機械應力損傷的風險。(5)成分明確，成本可控，能夠避免動物血清帶來的不利影響。

不難看出，含有動物血清的完全細胞培養基難以滿足離體組織長時間保存運輸的需要，而開發成分明確、性能可靠且穩定的無血清保存液無疑是更好的選擇。中國專利CN201810901395.0公開了一種腫瘤組織高活性儲存運輸液及其制備方法，該保存液以DMEM培養基為基礎，成分明確，能夠保持腫瘤組織的活性，延長腫瘤組織在體外的保存時間，運輸48h后，乳腺癌、肺癌組織原代培養的成活率可達90％。但在更長時間保存運輸條件下可能存在一定的不足：(1)該保存液中采用碳酸氫鈉緩沖體系，常規條件下，CO₂濃度較低，難以發揮較好的緩沖作用；(2)DMEM培養基營養成分有限，缺少某些脂類物質和金屬離子的載體蛋白，無法滿足腫瘤組織更長時間保存運輸的需求；(3)缺少防止細胞水腫可能給細胞帶來損傷的防范措施。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的上述不足，提供一種無血清組織保存液，成分明確、性能穩定，適用于離體腫瘤組織低溫條件下長時間密閉保存運輸，更好的滿足臨床新鮮腫瘤組織的保存運輸需求。

本發明的第一個目的是提供一種腫瘤組織保存液。

本發明的第二個目的是提供任一所述腫瘤組織保存液在保存實體瘤組織中的應用。

為了實現上述目的，本發明是通過以下方案予以實現的：