[發(fā)明專(zhuān)利]一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011640671.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112646922A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張萍;崔海月;趙亮;顧玉蓮;伏容
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江華大檢測(cè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 南京創(chuàng)略知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32358
• 代理人: 朱希敏

1.一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：包括以下步驟，

(1)提取樣品DNA，采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)樣品DNA篩選基因或品系特異性片段擴(kuò)增；

(2)根據(jù)實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增曲線，判斷該樣品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分；

(3)對(duì)外源基因檢測(cè)陽(yáng)性的樣品，或已知為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性的樣品，根據(jù)PCR擴(kuò)增結(jié)果，判定該樣品中含有轉(zhuǎn)基因品系成分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述步驟(1)中，采用具有相同效果的植物基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：步驟(1)中，樣品DNA用紫外分光光度計(jì)測(cè)定260nm和280nm處吸收值，分別計(jì)算核酸的純度和濃度，計(jì)算公式如下，

DNA濃度(mg/mL)＝50×OD2so。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述步驟(2)，判斷該樣品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分，采用每個(gè)樣品應(yīng)有2個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)每次檢測(cè)必須設(shè)立3個(gè)對(duì)照；

(1)陽(yáng)性對(duì)照，為對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植物樣品品系或含有相應(yīng)外源基因的轉(zhuǎn)基因植物樣品基因組DNA，或含有上述片段的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子DNA；

(2)陰性對(duì)照，非轉(zhuǎn)基因植物樣品DNA；

(3)空白對(duì)照，設(shè)兩個(gè)，一是提取DNA時(shí)設(shè)置的提取空白對(duì)照，二是PCR反應(yīng)的空白對(duì)照。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述步驟(2)中，對(duì)實(shí)時(shí)熒光PCR預(yù)混液進(jìn)行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反應(yīng)緩沖液、氯化鏡、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述步驟(2)中，測(cè)試樣品檢測(cè)Ct值大于或等于40，內(nèi)源基因檢測(cè)Ct值小于或等于30，則可判斷該樣品不含所檢基因或品系；測(cè)試樣品檢測(cè)Ct值小于或等于36，內(nèi)源基因檢測(cè)Ct值小于或等于30，則可判斷該樣品含所檢基因或品系；測(cè)試樣品檢測(cè)Ct值在36-40之間，調(diào)整模板濃度重做實(shí)時(shí)熒光PCR。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述步驟(1)中，實(shí)時(shí)熒光PCR為實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，熒光信號(hào)的強(qiáng)弱直接反映模板數(shù)量。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種植物加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢驗(yàn)方法，其特征在于：所述Ct值為每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。