[發(fā)明專利]一種檢測(cè)Citrin缺乏癥基因的引物、探針及其試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011639518.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN112725432B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝俊;葛毅媛;謝龍旭;韋薇;黃嘉慧;劉惠敏;鐘如燕;曾雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司;鄭州凱普醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所（有限合伙）;廣東凱普生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)Citrin缺乏癥基因的引物、探針及其試劑盒。具體提供了一種檢測(cè)Citrin缺乏癥SLC25A13基因突變的多重PCR引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～16所示，以及檢測(cè)Citrin缺乏癥SLC25A13基因突變的探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO.18～39所示；并提供了一種檢測(cè)Citrin缺乏癥的基因芯片和檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒僅通過一次試驗(yàn)就能同時(shí)檢測(cè)13種Citrin缺乏癥SLC25A13基因類型，在同一個(gè)條件下擴(kuò)增Citrin缺乏癥基因，能夠減少PCR儀的需求量，減少操作步驟，降低了成本。本發(fā)明的試劑盒不僅特異性好、靈敏度高，而且檢測(cè)時(shí)間短、成本低、操作方便，對(duì)開展Citrin缺乏癥人群的臨床篩查、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷具有重大的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種檢測(cè)Citrin缺乏癥基因的引物、探針及其試劑盒。

背景技術(shù)

希特林缺乏癥(Citrin deficiency,CD)是由人體等位基因SLC25A13突變，導(dǎo)致肝細(xì)胞中一種被稱為希特林(Citrin)的載體蛋白功能障礙而形成的一種常染色體隱形遺傳疾病。該基因位于染色體7q21.3上，由18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子組成，編碼一種被稱為希特林(Citrin)的載體蛋白。Citrin是主要表達(dá)于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)膜的一種鈣調(diào)節(jié)蛋白，含有4個(gè)EF手模體和6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，其功能主要是作為線粒體中天冬氨酸/谷氨酸載體，將線粒體內(nèi)合成的天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)到胞質(zhì)，同時(shí)把胞質(zhì)中的谷氨酸和質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)線粒體內(nèi)。這一過程與蘋果酸穿梭、檸檬酸穿梭、尿素循環(huán)、蛋白質(zhì)合成、糖酵解、糖異生等生化反應(yīng)相偶聯(lián)，對(duì)于肝細(xì)胞正常生理功能的發(fā)揮至關(guān)重要。

CD有3種年齡相關(guān)的臨床表型，分別為Citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥(neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin dediciency,NICCD)、成人發(fā)病瓜氨酸血癥II型(adult-onset citrullinemia type II,CTLN2)以及citrin缺陷導(dǎo)致的生長(zhǎng)發(fā)育落后和血脂異常(failure to thrive and dyslipidemia caused by ci trindeficiency,FTTDCD)。嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積發(fā)病率約為1/2500-1/5000，是兒童最常見的肝病類型之一，我國一些地區(qū)進(jìn)行的遺傳代謝選擇性篩查研究結(jié)果表明，NICCD陽性率僅次于甲基丙二酸尿癥，在中國遺傳代謝病高危患者中居第2位。據(jù)報(bào)道，中國人群中SLC24A13基因突變的攜帶率達(dá)到1/63，而南方人群的攜帶率高達(dá)1/48。以長(zhǎng)江為界，南方人群的突變攜帶率明顯高于北方人群，其中南方人群中以海南、廣東、香港為高發(fā)人群。

患有Citrin缺陷癥的新生兒無法代謝母乳中的很多成分，必須停止母乳喂養(yǎng)，否則可能會(huì)引起黃疸、肝硬化等重癥。而患有成人發(fā)病瓜氨酸血癥II型的病人如果不進(jìn)行及時(shí)的治療將會(huì)導(dǎo)致死亡。因此，對(duì)Citrin缺陷癥患者進(jìn)行早期診斷具有重要的臨床意義，通過對(duì)NICCD患者進(jìn)行早期的診斷，指導(dǎo)飲食的調(diào)整，可有效的防止病情惡化，降低治療風(fēng)險(xiǎn)和死亡率。另外，有Citrin缺陷癥的嬰兒，會(huì)有大量膽汁淤積在肝內(nèi)，導(dǎo)致嬰兒患黃疸并長(zhǎng)時(shí)間都不能治愈。更為嚴(yán)重的是，大約2％的患兒會(huì)因?yàn)楦喂δ懿幻髟虻膼夯枰M(jìn)行肝臟移植。因此，在Ci trin遺傳缺陷病高發(fā)的地區(qū)開展新生兒疾病的篩查工作，普及Citrin缺陷病知識(shí)，對(duì)于疾病控制以及優(yōu)生優(yōu)育具有重要作用，也是精準(zhǔn)醫(yī)療發(fā)展的要求。

NICCD的癥狀具有暫時(shí)性和復(fù)雜性的特點(diǎn)，因而難以建立明確的臨床診斷指標(biāo)，因此，基因檢測(cè)是最適合用于Citrin缺陷癥的診斷方法。對(duì)于黃疸、肝大和肝功能異常的患兒，檢查SLC24A13基因即可明確診斷是否患希特林缺陷癥。