[發明專利]一種動物模型制備方法

在審

• 申請號: 202011637571.8
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112825813A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 何波;皮江媛;黃益龍;羅保發;楊鎧文;馬寄耀;蔣元明;張振光
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61D1/00
• 代理公司: 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210
• 代理人: 牛林濤

本發明公開了一種動物模型制備方法，包括在X線透視引導下，從腰部側后入路通過椎間盤穿刺給予大鼠PBS沖液，構建盤源性腰痛動物模型，本發明通過多種腰疼痛行為學檢測、椎間盤退變組織學和影像學方法對該模型進行評估，鑒定疾病動模型的性能。本發明采用X線透視引導的方式，一方面操作簡便高效，定位準確，不需要添加細胞因子等誘導劑，除PBS外無其他誘導劑，價格經濟，另一方面，采用精準細針穿刺，無需解剖腹部或背部手術后進行椎間盤破壞等復雜外科操作，手術難度低，簡單易行，感染率和死亡率低，且對脊柱骨骼及腹背部肌肉創傷小，可更好的用于評估盤源性腰痛的發生發展過程。

技術領域

本發明涉及動物模型制備技術領域，尤其涉及一種動物模型制備方法。

背景技術

腰痛是一種常見的骨骼肌肉疼痛性疾病，全球人口患病率高達31％，其中終生患病高達60％-80％，因其致殘率高，致病因素復雜，治療效果差，醫療成本高，給社會和家庭帶來巨大的負擔。椎間盤退變是腰痛的主要原因，因而如何治療盤源性腰痛一直是國內外的研究熱點，目前，各種藥物在應用臨床前，必須現在動物模型上保證其有效性和安全性，外科手術或穿刺破壞動物椎間盤(開腹或背部機械創傷)是最常見的動物模型，而他們在實際應用中存在許多問題，因而尋找一種除椎間盤外骨骼肌肉結構損傷小，操作簡便，科學合理的盤源性腰痛動物模型迫在眉睫。

如何微創但又精準損傷腰椎間盤是合理構建盤源性腰痛動物模型的主要問題，采用手術外科方式進行動物切開腹部和背部，并破壞脊柱骨質結構，雖然可保證椎間盤的精確損傷，但該類方式損傷過大，且破壞維持脊柱穩定性的其他解剖結構，如腹背部核心肌群、脊柱小關節、韌帶及神經等，此外該方法手術具有操作難度大和模型不穩定等問題，而采用直接穿刺椎間盤方式，具有操作簡便和經濟實用的優勢，但因其定位精準性差，易損傷神經及損傷程度不好掌控等原因往往很難獲得穩定高效的盤源性腰痛動物模型，因此本發明提出了一種動物模型制備方法來解決上述問題。

發明內容

本發明目的在于克服現有外科手術構建盤源性腰痛造模的缺陷，而提供了一種動物模型制備方法，具體技術方案如下：

本發明提供了一種動物模型制備方法，包括：

(1)實驗動物準備：準備230g-250g健康成年Sprague Dawley大鼠；

(2)在大鼠背部選取細針穿刺點；

(3)在X線透視引導下，細針進入椎間盤髓核中心部位；

(4)將PBS注入椎間盤髓核中心，即可得到盤源性腰痛動物模型；

(5)評估該盤源性腰痛動物模型。

上述技術方案中，大鼠具有和人類脊柱及椎間盤類似的解剖結構，價格低廉，對疼痛較為敏感，且被量化檢測。

在本發明中，所述的穿刺點為大鼠背部側后方，位于第5和第6腰椎橫突和上關節突之間，進針角度為45°。

在本發明中，所述穿刺椎間盤選取第4-5和第5-6水平，細針大小為26G。

在本發明中，所述PBS的給藥體積為每只大鼠每個椎間盤2.5μL。

本發明還提供了一種動物模型制備方法，在X線透視引導下穿刺后，按設定的時間點對大鼠進行腰痛行為學檢測，對第4-5和第5-6椎間盤進行組織學和影像學表征。

上述技術方案中通過多角度檢測手段評估疾病模型的性能，使得評估結果更為準確可靠。

本發明與現有技術相比具有的有益效果是：

1、本發明在X線透視引導下，從腰部側后入路通過椎間盤穿刺給予大鼠PBS沖液，構建盤源性腰痛動物模型，減少腹部和背部外科手術造模對肌肉、脊柱小關節、神經和韌帶的損傷，使得模型更加科學合理和符合疾病發展；