[發(fā)明專利]一種外泌體分泌誘導(dǎo)劑及誘導(dǎo)培養(yǎng)基和應(yīng)用其的外泌體的生產(chǎn)方法及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011636845.1 | 申請日： | 2020-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN112920991B | 公開（公告）日： | 2022-06-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張建民;王靚;曲典;林埕宇 | 申請（專利權(quán)）人： | 國典（北京）醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074;C12N5/0735;A61K35/28;A61P39/06 |
| 代理公司： | 北京尚誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322 | 代理人： | 葉占洋;魯兵 |
| 地址： | 100176 北京市大興區(qū)經(jīng)*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 外泌體 分泌 誘導(dǎo)劑 誘導(dǎo) 培養(yǎng)基 應(yīng)用 生產(chǎn) 方法 | ||
1.一種生產(chǎn)外泌體的方法，其包括以下步驟：
1）將對數(shù)生長期且生長狀態(tài)良好的干細胞貼壁培養(yǎng)至覆蓋率達到60%～70%，所述干細胞選自誘導(dǎo)多能干細胞和間充質(zhì)干細胞；
2）換用其中含有外泌體分泌誘導(dǎo)劑的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對步驟1）貼壁培養(yǎng)的干細胞進行外泌體分泌誘導(dǎo)培養(yǎng)20～30小時，取上清收獲含外泌體的細胞培養(yǎng)液；
3）從步驟2）收獲的含外泌體的細胞培養(yǎng)液中分離獲得外泌體；
其中所述外泌體分泌誘導(dǎo)劑為以下使用濃度的成分：
L-抗壞血酸或其鹽 15-100 mg/L；
硒或其鹽 2-100 μg/L；
NaHCO3 200-1000 mg/L；
胰島素 5-30 mg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：重復(fù)步驟2）2～3次，合并每次收獲的含外泌體的細胞培養(yǎng)液，從所述合并的細胞培養(yǎng)液中分離獲得外泌體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟2）中所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，步驟3）中所述分離的方法包括差速離心法、超濾離心法、密度梯度離心法、沉淀法、磁珠免疫法、PS親和法、色譜法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，步驟3）中獲得的所述外泌體的數(shù)量達到外泌體在干細胞中的分泌量≥1000個/細胞，所述外泌體的粒徑為30～150 nm，表面標志物中CD9占比≥23%，CD63占比≥10%。
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