[發明專利]一種啟動子及其制備方法

有效

• 申請號: 202011636482.1
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112662672B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 唐克軒;李勇鵬;付雪晴;孫光新
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;蘇州唐基生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 上海宛林專利代理事務所(普通合伙) 31361
• 代理人: 馬平麗

本申請公開了一種啟動子，其特征在于，包括甲基茉莉酸響應順式作用元件、光響應順式作用元件、35S啟動子和5’UTR區域，所述甲基茉莉酸響應順式作用元件和光響應順式作用元件位于所述35S啟動子序列的5’端，所述5’UTR區域位于所述35S啟動子序列的3’端，所述35S啟動子的序列如SEQ ID NO.1所示。

技術領域

本發明涉及生物合成領域，尤其涉及一種啟動子及其制備方法。

背景技術

啟動子是表達單元的重要元件，用來驅動下游基因的表達。在植物生物技術中常用的啟動子包括組成型啟動子、組織/器官或時期特異性啟動子及誘導型啟動子三大類。其中35S啟動子是植物載體構建中應用最為廣泛的組成型啟動子，它來自于花椰菜花葉病毒35S基因的啟動子序列，花椰菜花葉病毒是植物中為數不多的雙鏈DNA病毒之一。它的啟動子在受感染的植物細胞中指導35s RNA的合成。與早前可以在植物中發揮作用的啟動子，細菌的章魚堿合酶(octopine synthase)基因啟動子Ocs和農桿菌胭脂堿合成酶(nopalinesynthase)基因啟動子Nos相比，該啟動子可以在多種植物(包括病毒宿主范圍之外的植物如單子葉植物)驅動RNA的高水平表達，因而被用于轉基因植物中各種基因的表達。

然而隨著合成生物學的快速發展，對于啟動子元件的活性及可控制性產生了更高的要求；為了進一步提高生物合成產量，研究啟動子活性的增強及控制策略對于通過合成生物學手段生產高價值代謝物及蛋白具有重要的意義。因此，本領域的技術人員致力于開發一種增強啟動子表達活性的方法及由此獲得的啟動子。

發明內容

有鑒于現有技術的上述缺陷，本發明所要解決的技術問題是如何提供表達活性增強的啟動子。

為實現上述目的，本發明提供了一種啟動子，其特征在于，包括光響應順式作用元件、35S啟動子、以及5’UTR區域，所述光響應順式作用元件位于所述35S啟動子序列的5’端，所述5’UTR區域位于所述35S啟動子序列的3’端，所述35S啟動子的序列如SEQ ID NO.1所示。

在某些實施方式中，所述光響應順式作用元件的序列如SEQ ID NO.2所示。

在某些實施方式中，所述5’UTR區域的序列如SEQ ID NO.3所示。

在某些實施方式中，所述啟動子命名為L35S，其序列如SEQ ID NO.4所示。

在某些實施方式中，所述啟動子還包括甲基茉莉酸響應順式作用元件，其序列如SEQ ID NO.5所示。

在某些實施方式中，所述啟動子命名為ML35S，其序列如SEQ ID NO.6所示。

另一方面，本申請還提供了一種增強啟動子表達活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、選擇光響應順式作用元件以及5’UTR區域，所述光響應順式作用元件序列如SEQ ID NO.2所示，所述5’UTR區域的序列如SEQ ID NO.3所示；

步驟二、將光響應順式作用元件和5’UTR區域與35S啟動子進行組裝，光響應順式作用元件位于35S啟動子的5’端，5’UTR區域位于所述35S啟動子序列的3’端，得到啟動子L35S。

在某些實施方式中，所述啟動子L35S的序列如SEQ ID NO.4所示。

在某些實施方式中，所述步驟一還包括選擇甲基茉莉酸響應順式作用元件，其序列如SEQ ID NO.5所示；所述步驟二還包括將所述甲基茉莉酸響應順式作用元件與所述啟動子L35S組裝，得到啟動子ML35S。

在某些實施方式中，所述啟動子ML35S的序列如SEQ ID NO.6所示。

本申請還提供了一種制備在植物中高效表達的啟動子的方法，包括以下步驟：