[發明專利]一種替考拉寧的結晶工藝

在審

• 申請號: 202011632371.3
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114685617A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 曾凡洲;朱兵峰;周涌;劉忠
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體公開了一種替考拉寧的結晶工藝，本發明通過向含有替考拉寧的溶液中，加入無機鹽或有機鹽，攪拌后再加入丙酮析晶，抽濾，將收集的固體溶解后再進行超濾除鹽濃縮，冷凍干燥得替考拉寧成品。本發明的結晶工藝晶體顆粒變大，易于過濾，提高了過濾效率，縮短生產周期。產品收率高、純度高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種替考拉寧的結晶工藝。

背景技術

替考拉寧是繼萬古霉素之后開發的另一種抗耐藥菌的糖肽類抗生素，其主要對革蘭陽性需氧菌和厭氧菌具有較強的抗菌活性，特別是針對MRSA所致感染有很好的療效，是目前臨床上為數不多的對多重耐藥性金葡菌和場球菌仍有抗菌活性的藥物之一。與當前國際上公認的抗耐藥菌抗生素萬古霉素相比，替考拉寧具有與之相似的抗菌活性，相同的作用機制，相近或更優的臨床療效，而且毒性反應更低，特別是腎毒性更低，也不會發生使用萬古霉素后引發的“紅人綜合征”。

替考拉寧是游動放線菌發酵生產的由多種成分組成的混合物，結構復雜，對熱、酸、堿穩定性差，生產過程中容易引起失活和分解，且發酵液中替考拉寧的含量較低，一般都需要較復雜的分離純化過程。對于替考拉寧的結晶方法，現有技術主要是向替考拉寧濃縮液中添加丙酮進行結晶或鹽析結晶或冷凍濃縮結晶的方法。專利200710107185.6和200710166015.5中公開了一種向替考拉寧濃縮液中添加丙酮進行結晶或鹽析結晶的方法，以上方法中，工藝繁瑣，鹽析結晶過程會容易包夾金屬鹽離子，引入雜質，降低樣品純度和效價。冷凍濃縮結晶法是需要對其冷凍過程的溫度嚴格控制，工藝復雜，操作時間長，且產品的收率較低，有關雜質不能有效去除，難以確保產品的質量。以上方法中丙酮結晶法最為簡便也最為常見，加入丙酮結晶后，需要通過固液分離把母液除去，固液分離比較困難，易堵塞濾孔，導致過濾時間長，難以產業化。因此，需要提供一種結晶工藝來克服這一缺陷。

發明內容

基于現有技術中，替考拉寧的丙酮結晶工藝中出現的過濾困難的問題，本發明提供一種替考拉寧的結晶工藝，提高替考拉寧晶體過濾的便利性，方便替考拉寧規模化生產。

一種替考拉寧的結晶工藝，向含有替考拉寧的溶液中，加入無機鹽或有機鹽，攪拌后再加入丙酮析晶，抽濾，將收集的固體溶解后再進行超濾除鹽濃縮，冷凍干燥得替考拉寧成品。

優選地，所述的無機鹽為氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、硫酸鎂、碳酸鈉、氯化銨、氯化鎂、氯化鈣中的一種或幾種；所述的有機鹽為醋酸鈉、檸檬酸鈉、醋酸銨中的一種或幾種。

優選地，向含有替考拉寧的溶液中，加入無機鹽；所述的無機鹽為氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉或氯化銨。

優選地，所述的無機鹽的加入量為1～6g/L；進一步優選，所述的無機鹽的加入量為1～3g/L。即替考拉寧溶液中加入無機鹽的終濃度為1～6g/L。

優選地，所述丙酮的量為5～8倍替考拉寧溶液體積。

本發明不限制丙酮的加入方式，其可以為連續流加方式，一次性加入或分批次加入。

優選地，加入丙酮后攪拌析晶，析晶時間為0.5～2h。

優選地，所述的超濾過程是將結晶后的固體用注射用水溶解，調節pH6.5～7.0，經超濾膜進行超濾，當濃縮至原體積1/3～1/4時，補充注射用水至原體積，繼續超濾濃縮，重復2～4次，最后濃縮至替考拉寧50～80g/L時停止超濾。

進一步優選地，所述的超濾膜截留分子量不超過1KDa。

優選地，所述的含替考拉寧的溶液是游動放線菌發酵液。

優選地，所述的發酵液還經膜過濾、柱層析洗脫，所得洗脫液。