[發明專利]一種用于排泄物處理的復合微生物菌劑及應用和復配方法

在審

• 申請號: 202011630962.7
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112812990A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 周小康;韓旭;張華;李永;王婧;張六六;王亞
• 申請（專利權）人: 宜興艾科森生態環衛設備有限公司;中國人民解放軍陸軍工程大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F17/80;C05F17/20;C12R1/10;C12R1/01
• 代理公司: 無錫市天宇知識產權代理事務所(普通合伙) 32208
• 代理人: 周舟

1.一種用于排泄物處理的復合微生物菌劑，其特征在于，包括嗜熱放線菌和地衣芽孢桿菌，嗜熱放線菌于2020年11月09日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏號為CGMCC No.21143；地衣芽孢桿菌于2020年11月09日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏號為CGMCC No.21144；嗜熱放線菌和地衣芽孢桿菌的復配比例為1:5~7。

2.根據權利要求1所述的用于排泄物處理的復合微生物菌劑，其特征在于，所述嗜熱放線菌的有效活菌數≥2×10⁸ cfu/g，地衣芽孢桿菌的有效活菌數≥2×10⁸ cfu/g。

3.權利要求1所述的用于排泄物處理的復合微生物菌劑應用于糞便排泄物的生物處理。

4.一種用于排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）固態發酵：將嗜熱放線菌和地衣芽孢桿菌分別進行固態發酵；

（2）干燥：將固發酵后的嗜熱放線菌和地衣芽孢桿菌在70℃的溫度下干燥，干燥后得到水量在10%以下的嗜熱放線菌產物和地衣芽孢桿菌產物；

（3）混合粉碎：將嗜熱放線菌產物和地衣芽孢桿菌產物按1:5~7的比例混合復配形成混合產物，將混合產物粉碎后，按含菌量達到要求的比例添加輔料得到成品，輔料為150~400目的膨潤土。

5.根據權利要求4所述的排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，嗜熱放線菌產物鮮基質中菌含量為1.0×10¹⁰ cfu/g，地衣芽孢桿菌發酵產物鮮基質中菌含量為2.5×10¹⁰ cfu/g。

6.根據權利要求4所述的排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，所述膨潤土為300目。

7.根據權利要求4所述的排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，所述嗜熱放線菌固態發酵采用以下步驟：

（1）搖瓶培養：將嗜熱放線菌菌株從保藏的斜面接種至搖瓶培養基內，靜置、55~60℃條件下活化培養12~14 h；所述搖瓶培養基的配方為蛋白胨、葡萄糖和水，蛋白胨、葡萄糖和水的質量比為25:15:1000，pH 7.0~7.5；

（2）種子培養：按2.0~3.0%的接種量將搖瓶培養基內的嗜熱放線菌接種至種子培養基內，在30~40 r/min轉速、55~60℃條件下培養10~12 h得到種子液；對種子液中的嗜熱放線菌進行計數，所述種子培養基配方為蛋白胨、牛肉膏和水，蛋白胨、牛肉膏、水的質量比為10~15:10~15:1000，pH 7.0~7.5；

（3）固態發酵：種子液接種至一號固態發酵培養基中進行發酵，55~60℃條件下培養4~5d即可得到嗜熱放線菌發酵產物，所述固態發酵培養基配方為以小麥麩為碳源和發酵基質，添加2~3%蛋白胨、1.5~2.0%NaCl、0.4%~0.5%營養液，初始pH 7.0~7.5。

8.根據權利要求7所述的排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，所述營養液由KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4組成，KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4的質量比為0.12:0.075:0.15:0.0001。

9.根據權利要求4所述的排泄物處理的復合微生物菌劑的復配方法，其特征在于，所述地衣芽孢桿菌固態發酵采用以下步驟：

（1）一級種子培養：將地衣芽孢桿菌菌株從保藏的斜面接種至一級種子培養基中培養2~3 d，洗下孢子后制成一級孢子懸液；所述一級種子培養基配方為0.5%蛋白胨、0.3%牛肉膏、97.2%~97.7%微量元素液、1.5%~2%瓊脂，調整pH為7.0~8.0，微量元素液包括CaCl2?2H2O、K2HPO4、(NH4)2HPO4、MgSO4?7H2O、MnSO4?H2O，CaCl2?2H2O、K2HPO4、(NH4)2HPO4、MgSO4?7H2O、MnSO4?H2O的質量比為0.5：0.2：3：0.1 ：0.1；

（2）二級種子培養：將一級孢子懸液涂布于二級種子培養基中培養2~3 d，洗下孢子后制成二級孢子懸液；所述二級種子培養基和一級種子培養基相同；

（3）固態發酵：將二級孢子懸液按103~104 cfu/g基質的接種量接種至二號固態發酵培養基中，培養5~6d，固態發酵溫度為60~65℃，初始pH值為7.0~8.0，獲得地衣芽孢桿菌發酵產物；所述二號固態發酵培養基配方為以玉米粉、黃豆粉、稻殼按32:3:65比例復配為固態發酵基質，將組成比例為0.04:0.075:0.05:0.15:0.01的 CaCl2、KH2PO4、 (NH4)2HPO4、MgSO4、MnSO4溶解后加入固態發酵基質內組成最終濃度為1.0%的無機鹽營養液。