[發明專利]一種戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶的制備方法與應用在審
| 申請號： | 202011630052.9 | 申請日： | 2020-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN112725318A | 公開（公告）日： | 2021-04-30 |
| 發明（設計）人： | 呂鳳霞;池慧兵;陸兆新;張充;別小妹;趙海珍;周立邦;陳美容;焦琳舒 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12N9/82 | 分類號： | C12N9/82;C12N15/55;C12N15/70;C12N15/75;A23L29/00 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 孫昱 |
| 地址： | 210095 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 分枝桿菌 天冬 酰胺酶 制備 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1. 一種戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶在抑制熱加工淀粉類食品中丙烯酰胺產生中的應用，所述戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.權利要求1所述的應用，其特征在于，所述戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶的制備方法包括以下步驟：
步驟1，構建戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶基因原核表達載體：將SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列導入表達載體中，然后轉化入感受態細胞，涂布于Kana抗性平板，挑取陽性轉化子測序；
步驟2，重組戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶的表達：重組菌接種于含有Kana的LB液體培養基中，培養過夜，制成種子液，然后轉接到相應含抗生素的LB液體培養基中，37℃ 培養至OD值0.6-0.8之間，加入IPTG，誘導表達；
步驟3，對表達后的菌體破碎、收集酶液并純化，得到戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟1中所述表達載體pET-30a、pET-32a或pET-28a中的任意一種。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟1中所述感受態細胞為大腸桿菌感受態細胞或枯草芽孢桿菌感受態細胞。
5. 一種抑制熱加工淀粉類食品中丙烯酰胺產生的添加劑，其特征在于，包括如SEQ IDNO.1所示核苷酸序列所編碼的戈登分枝桿菌L-天冬酰胺酶。
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