[發(fā)明專利]一種利用微生物和植物聯(lián)合固化道路邊坡土壤的方法

有效

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• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112854250B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡國祥;肖春橋
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢工程大學(xué)
• 主分類號: E02D17/20
• 分類號: E02D17/20;A01G22/00;A01G7/06;A01G20/00
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 閉釗

1.一種利用微生物和植物聯(lián)合固化道路邊坡土壤的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：(a)采集道路邊坡土壤樣品，經(jīng)富集、純化、篩選得到產(chǎn)脲酶微生物；(b)從道路邊坡土壤中篩選出具有固土能力的植物；(c)將步驟(a)篩選得到的產(chǎn)脲酶微生物接種到步驟(b)篩選得到的固土植物根際，然后將固土植物種植在待處理道路邊坡土壤中，聯(lián)合培養(yǎng)即可；步驟(a)得到的產(chǎn)脲酶微生物在接種至固土植物根際聯(lián)合培養(yǎng)前還需要再次篩選，篩選指標(biāo)為是否具有促進植物生長能力以及是否具有誘導(dǎo)碳酸鈣沉淀能力；其中是否具有促進植物生長能力的篩選過程具體如下：將步驟(a)得到的產(chǎn)脲酶微生物分別接種到溶磷液體培養(yǎng)基、解鉀液體培養(yǎng)基、無氮固體培養(yǎng)基中于28-35℃下培養(yǎng)，取樣檢測培養(yǎng)期內(nèi)微生物菌種的溶磷、解鉀、固氮能力，篩選出目標(biāo)產(chǎn)脲酶微生物；是否具有誘導(dǎo)碳酸鈣沉淀能力的篩選過程具體如下：將氯化鈣、尿素混合后加水制成膠結(jié)液，將篩選出的具有促進植物生長能力的菌液與膠結(jié)液混合，所得混合液置于28-35℃下靜置恒溫培養(yǎng)，取樣檢測樣品中的碳酸鈣沉淀量，確定出目標(biāo)產(chǎn)脲酶微生物。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(a)具體過程如下：將采集到的土壤樣品與無菌水混合制成混懸液，過濾后取濾液上清液涂布于LB固體培養(yǎng)基上，28-35℃下倒置恒溫培養(yǎng)，得到不同形態(tài)的單菌落；對各個單菌落分別劃線，并再次接種到LB固體培養(yǎng)基中于同樣條件下培養(yǎng)；重復(fù)劃線純化培養(yǎng)2-3次，直至獲得較純的菌株；將純化后的微生物菌株接種至尿素瓊脂培養(yǎng)基中，28-35℃下倒置恒溫培養(yǎng)，選擇使尿素瓊脂培養(yǎng)基變紅的菌株確定為產(chǎn)脲酶微生物。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述LB固體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計的配方為：蛋白胨8-10份，酵母浸粉3-5份，NaCl 8-10份，瓊脂15-25份，蒸餾水1000份，pH為6-7；所述尿素瓊脂培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計的配方為：尿素10-20份，NaCl 5-8份，KH₂PO₄ 2-5份，蛋白胨0.5-1.5份，酚紅0.01-0.02份，瓊脂15-25份，蒸餾水1000份，pH為6-7。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：篩選是否具有促進植物生長能力的培養(yǎng)過程中，兩種液體培養(yǎng)基的攪拌速度為120-170r/min，恒溫振蕩培養(yǎng)時間為5-9天，無氮固體培養(yǎng)基倒置恒溫培養(yǎng)時間為2-4天。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶磷液體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計的配方為：葡萄糖8-10份，酵母浸粉0.3-0.5份，(NH₄)₂SO₄ 0.3-0.5份，KCl0.1-0.3份，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15份，CaCl₂ 0.5-1.5份,FeSO₄·7H₂O 0.02-0.04份，Ca₃(PO₄)₂ 3-5份，蒸餾水1000份，pH為6-7；所述解鉀液體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計的配方為：蔗糖8-10份，MgSO₄·7H₂O0.3-0.5份，(NH₄)₂SO₄ 0.1-0.3份，NaCl 0.05-0.15份，CaCO₃ 0.05-0.15份，鉀長石粉3-5份，蒸餾水1000份，pH為6-7；所述無氮固體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計的配方為：葡萄糖8-10份，K₂HPO₄·3H₂O 0.5-0.8份，NaCl 0.1-0.3份，CaCO₃ 0.5-1.5份，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3份，瓊脂15-25份，蒸餾水1000份，pH為6-7。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：氯化鈣、尿素混合時的質(zhì)量比為1-2.5:1，膠結(jié)液的濃度范圍為0.125-2mol/L，菌液與膠結(jié)液混合時的體積比為1:1-4。