[發(fā)明專利]一種抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)和表面展示系統(tǒng)及它們的構(gòu)建方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011626745.0
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112760336A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鐘惟德;朱國棟;王曉虎;江福能;朱建國;黃新珠;劉豐;鄒翠云;陳曉佳;王曉楊
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州輝園苑醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C07K19/00;C12N15/62;C12N1/21;C12R1/01
• 代理公司: 廣州晟策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44709
• 代理人: 王靜

本發(fā)明屬于載體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)和表面展示系統(tǒng)及它們的構(gòu)建方法。本發(fā)明的抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)和抗原表位肽的表面展示系統(tǒng)，均包括了如SEQ ID NO.1所示的編碼鞭毛蛋白的核心核苷酸序列；或如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列經(jīng)過替換、添加、缺失中的至少一種編輯方式，突變至少一個核苷酸，且所述突變核苷酸序列編碼的蛋白與鞭毛蛋白具有相同功能的核苷酸序列。本發(fā)明基于細(xì)菌鞭毛蛋白提供了一種更穩(wěn)定的嫁接抗原表位肽表達(dá)和表面展示的“基座”，并利用鞭毛蛋白本身的特性增強抗原表位肽的免疫應(yīng)答反應(yīng)，安全性高，激活效果好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于載體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)和表面展示系統(tǒng)及它們的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

抗原提呈細(xì)胞，例如樹突狀細(xì)胞，提呈給免疫細(xì)胞的是一種短肽，而不是整個抗原蛋白。目前通過生物信息學(xué)可以快速設(shè)計出這些短肽。根據(jù)免疫激活原理，短肽在調(diào)控免疫上具有許多應(yīng)用前景。但短肽應(yīng)用也有明顯的缺點，就是不穩(wěn)定，極易降解。

目前臨床常用的免疫疫苗方案有整個病原滅活方案、病原蛋白重組表達(dá)純化方案、病原蛋白體內(nèi)轉(zhuǎn)錄表達(dá)方案(例如腺病毒、mRNA疫苗)等方案。

傳統(tǒng)的重組蛋白方案，如專利申請?zhí)枮?01910133195.X的專利申請文獻(xiàn)，其表達(dá)完全或部分蛋白系統(tǒng)(不是短肽)：例如通過基因編輯技術(shù)，在不改變基因的編碼區(qū)氨基酸序列的條件下，或在其非編碼區(qū)且不影響整個蛋白表達(dá)的條件下，對編碼整個目的蛋白的基因序列進(jìn)行修改，獲得新的重組基因，再將重組基因連接到質(zhì)粒，得到重組載體，將所述重組載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，利用感受態(tài)細(xì)胞中的轉(zhuǎn)座系統(tǒng)，將融合基因轉(zhuǎn)座至桿狀病毒穿梭載體中，得到重組質(zhì)粒，將所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入特定細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒，并以特定細(xì)胞為宿主細(xì)胞培養(yǎng)病毒，采用親和層析法純化帶有His標(biāo)簽的目的蛋白。其將整個有免疫反應(yīng)的蛋白單純地融合在一起，并且用桿狀病毒感染細(xì)胞而表達(dá)出蛋白。

利用細(xì)菌作為一個表達(dá)系統(tǒng)方案(可以表達(dá)各類蛋白)，如申請?zhí)枮?02010962886.3的專利文獻(xiàn)：通過將合成密碼子優(yōu)化的單鏈抗體序列和合成分泌信號肽和相應(yīng)蛋白的序列的基因酶切克隆到乳酸乳球菌載體中構(gòu)建得到重組質(zhì)粒，通過電轉(zhuǎn)化入乳酸乳球菌感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)分離純化獲得分泌表達(dá)單鏈抗體。

利用因特網(wǎng)技術(shù)對目標(biāo)蛋白表位進(jìn)行預(yù)測，然后根據(jù)預(yù)測比對結(jié)果選擇最優(yōu)的合成抗原表位肽，由于抗原表位肽性質(zhì)不穩(wěn)定因此需要用到緩沖液包被并低溫保存，通過實驗結(jié)果可知，抗原表位肽容易溶解(EB病毒BALF4基因的短肽合成及在鼻咽癌檢測中的應(yīng)用，黃建華，廖媛，陳江玲，胡波，實用醫(yī)學(xué)雜志2016年第32卷第19期3187-3189)。所以單純的短肽極易降解，一般是用合成方式來生產(chǎn)性價比高，但在體內(nèi)的不穩(wěn)定性限制其臨床使用。

現(xiàn)有技術(shù)方案存在以下問題：1、蛋白質(zhì)是由多肽折疊形成，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)決定了蛋白質(zhì)的功能，簡單地將具有免疫反應(yīng)的多個不同蛋白融合在一起，外源基因片段大，有可能發(fā)生多肽折疊方式改變，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能改變，引發(fā)疾病；也有可能會引發(fā)基因重組，還可能因為帶入了多種功能基因在表達(dá)抗原的同時引發(fā)了其他疾病，不安全，這也是DNA疫苗一直未被批準(zhǔn)的原因。2、重組蛋白一般是大片段的重組，生成的蛋白會有相應(yīng)的功能單元，如果轉(zhuǎn)入細(xì)菌或者直接作為DNA疫苗，這些新的DNA片段可能會被細(xì)菌吸收，進(jìn)一步可能發(fā)生DNA重組，可能導(dǎo)致生成具有新功能的致病細(xì)菌。3、單純合成的抗原肽片段小，不穩(wěn)定，構(gòu)成短肽的氨基酸分子易溶于水，而且直接合成的費用高，進(jìn)入人體也不穩(wěn)定，不能引起機體的免疫反應(yīng)。

足見現(xiàn)有技術(shù)還不夠成熟，還有待完善。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于此，有必要針對上述問題提供一種抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)和表面展示系統(tǒng)及它們的構(gòu)建方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種抗原表位肽的表達(dá)系統(tǒng)，包括如下(1)或(2)的序列：