[發明專利]一種超快速檢測生物硫醇熒光探針的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202011624013.8
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112851650B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 馬開慶;趙玲玲;陰彩霞
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07D405/14
• 分類號: C07D405/14;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 郭海燕

1.一種超快速檢測生物硫醇的熒光探針，其特征在于：所述熒光探針為［2-（7-二乙胺基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-基］-甲基-N，N-二甲基-4（1H）-吡啶亞基碳酸酯，其結構式為：

。

2.一種權利要求1所述的超快速檢測生物硫醇的熒光探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，3-羥甲基-5-甲基水楊醛的合成：將2，6-雙（羥甲基）-對甲酚和MnO₂加入丙酮中，室溫下攪拌過夜，過濾，濾液濃縮所得殘余物，經柱色譜分離，得到白色固體，即3-羥甲基-5-甲基水楊醛；

步驟2，7-(二乙氨基)香豆素的合成：將4-(二乙氨基)水楊醛、丙二酸二乙酯溶于無水乙醇中，攪拌并加入哌啶，75 ~ 100℃進行回流反應6 ~ 10 h，反應結束后旋去有機溶劑，繼續加入濃鹽酸、冰醋酸，100 ~ 120℃進一步回流反應6 ~ 10 h，冷卻至室溫，倒入冰水中，并加10 mmol/L的氫氧化鈉調至pH=5，攪拌20~30 min后抽濾、水洗，經真空干燥得土黃色固體，即7-(二乙氨基)香豆素；

步驟3，7-(二乙氨基)香豆素-3-醛的合成：將三氯氧磷在冰水浴條件下逐滴加入到N,N-二甲基甲酰胺中，惰性氣體氛圍下攪拌20~30 min形成混合液，將混合液加入溶有7-(二乙氨基)香豆素的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，55 ~ 80℃攪拌10 ~ 14 h，冷卻至室溫，倒入冰水中，加入5 mmol/L氫氧化鈉調至pH=6，攪拌20~30 min后抽濾、水洗并真空干燥得到粗產物，利用無水乙醇重結晶得到橘黃色晶體，即7-(二乙氨基)香豆素-3-醛；

步驟4，5-(羥甲基)-7-甲基-3, 3a-二氫環戊[b]色滿環-1(2H)-酮的合成：將3-羥甲基-5-甲基水楊醛，環戊-2-烯-1-酮和1-H-咪唑溶于四氫呋喃和蒸餾水混合溶液中形成混合物，將混合物在室溫攪拌90 ~ 108 h，用1 mol / L 的HCl溶液稀釋，用乙酸乙酯萃取三次，濾液濃縮所得殘余物，通過硅膠柱層析分離，獲得5-(羥甲基)-7-甲基-3, 3a-二氫環戊[b]色滿環-1(2H)-酮；

步驟5，2-（7-二乙氨基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-芐醇的合成：將5-(羥甲基)-7-甲基-3, 3a-二氫環戊[b]色滿環-1(2H)-酮，7-(二乙氨基)香豆素-3-醛加入無水乙醇中攪拌溶解，逐滴加入哌啶，之后于封管中，55 ~ 65℃加熱攪拌2.8 ~ 3.2 h，旋去有機溶劑得粗產物，即2-（7-二乙氨基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-芐醇；

步驟6，2-（7-二乙胺基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-甲氧基甲酰氯的合成：將2-（7-二乙氨基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-芐醇溶解在3 mL二氯甲烷中，在0℃條件下加入三光氣，并逐滴加入三乙胺，在惰性氣體氛圍下攪拌10~30 min后移至室溫，繼續攪拌3 ~3.5h，TLC點板監測反應至原料反應完，旋去有機溶劑，通過硅膠柱層析分離，得到化合物2-（7-二乙胺基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-甲氧基甲酰氯；

步驟7，探針的合成：將2-（7-二乙胺基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-甲氧基甲酰氯溶解于二氯甲烷，依次加入4-二甲氨基吡啶、三乙胺形成混合液，將混合液于10℃ ~ 30℃攪拌6 h ~ 12 h，旋去有機溶劑，用乙醚洗去雜質，通過硅膠柱層析得到所需探針，即［2-（7-二乙胺基香豆素）亞甲基-7-甲基-1-氧-3，3a-二氫環戊[b]色滿環-5-基］-甲基-N，N-二甲基-4（1H）-吡啶亞基碳酸酯。

3.根據權利要求2所述的一種超快速檢測生物硫醇的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述步驟1中2，6-雙（羥甲基）-對甲酚和MnO₂用量的摩爾比為1：7.5 ~ 8，柱色譜分離為石油醚：乙酸乙酯＝2：1。