[發明專利]一種便攜式微生物誘導碳酸鈣沉淀試劑盒及其在修復路面基層早期裂縫中的應用

在審

• 申請號: 202011623416.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112779182A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 胡國祥;肖春橋
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;E01C3/00;C12N1/02;C12R1/11
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 閉釗

1.一種便攜式微生物誘導碳酸鈣沉淀試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括至少三個相互獨立的組分，其中第一組份為產脲酶菌菌液，第二組分為尿素，第三組分為鈣源。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述產脲酶菌菌液由產脲酶菌、蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、蒸餾水混合而成。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述產脲酶菌菌液中蛋白胨的含量為8-10g/L，酵母提取物的含量為3-5g/L，氯化鈉的含量為8-10g/L，紫外分光光度計測得的菌液OD₆₀₀＝1.3-1.8。

4.如權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于：所述產脲酶菌具體為巨大芽孢桿菌。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述產脲酶菌的分離、富集、篩選過程具體如下：

a)采集道路路側地表以下10-30cm深的土壤樣品，加水制成土壤混懸液，滅菌后完成芽孢富集；

b)將步驟a)得到的土壤混懸液涂布至LB固體培養基上，28-30℃下恒溫培養22-24h；

c)從步驟b)所得平板中挑選出形態不同的單菌落進行劃線，于28-30℃下恒溫培養20-24h；重復挑選單菌落-劃線培養多次，直至獲得較純的菌株；

d)將步驟c)得到的純菌株接種至尿素瓊脂培養基上，28-30℃培養40-48h，選擇使培養基變成粉紅色的菌株確定為目標產脲酶菌；

e)將步驟d)篩選出的產脲酶菌接種至裝有LB培養液的搖瓶中，控制搖瓶中菌液OD₆₀₀＝1.2-1.5，于28-30℃、165-180rpm/min轉速下培養得到菌液；配制總濃度為0.5-2.0M的尿素-氯化鈣水溶液并調節其pH至7.2-7.4，按照1:4-6的體積比將菌液與尿素-氯化鈣水溶液混合均勻，28-30℃靜置48-72h后取樣測量碳酸鈣沉淀量；選擇碳酸鈣沉淀量最高的產脲酶菌確定為最終目標菌株。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述LB固體培養基按照重量份數計的配方為：蛋白胨8-10份、酵母提取物3-5份、NaCl 8-10份、瓊脂粉15-20份，蒸餾水1000份，pH＝7.2-7.4；所述尿素瓊脂培養基按照重量份數計的配方為：尿素10-20份、NaCl 5-7份、KH₂PO₄2-4份、蛋白胨0.5-1.5份、酚紅0.01-0.02份、瓊脂15-20份、蒸餾水1000份，pH＝6.8-7.0；所述LB培養液的組成為：蛋白胨8-10g/L，酵母提取物3-5g/L，氯化鈉8-10g/L，溶劑為蒸餾水。

7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：第二組分中的尿素具體為固體尿素；第三組分中的鈣源選自固體氯化鈣、固體硝酸鈣中的至少一種，優選為固體氯化鈣、固體硝酸鈣的混合物。

8.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括第四組分，所述第四組份包括獨立包裝的蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉，三者的質量比為1-3:0.5-2:1-3。

9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中第一組分、第二組分、第三組分、第四組分的比例為200mL:240-720g:548-1644g:2.5-8g。

10.權利要求1-9任一項所述便攜式微生物誘導碳酸鈣沉淀試劑盒在修復水泥穩定碎石路面基層早期裂縫中的應用。