[發明專利]一種雙向抗體重組的外泌體及其制備方法

在審

• 申請號: 202011620768.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112941029A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 徐麗梅;段莉;梁宇杰;徐曉
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院(深圳市轉化醫學研究院)
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12N15/62;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 吳彩鳳

本發明公布了一種雙向抗體重組的外泌體，該外泌體為CAR?Exos，其包括有兩種抗體，其中一個為具有遺傳編碼的抗人CD3抗體，另一個為具有遺傳編碼的抗人CD38抗體，本發明還公布了一種雙向抗體重組的外泌體的制備方法，包括以下制作步驟：步驟一：每50mL細胞需要準備50μg pDisplay?CD3 scfv?CD38 nanobody質粒，用2mL Opti?MEM培養基稀釋質粒，混勻后靜置5分鐘；與現有技術相比，本發明的有益效果是：產生的雙重靶向T細胞CD3和CD38受體的CAT?Exos可以將人T細胞募集到CD38陽性多發性多發骨髓瘤細胞中，達到靶向治療的目的。

技術領域

本發明涉及基因技術領域，具體為一種雙向抗體重組的外泌體及其制備方法。

背景技術

CAR-T細胞療法是指將經過設計的CAR-T細胞可在實驗室培養生長，達到數十億之多將擴增后的CAR-T細胞注入到患者體內，注入之后的T細胞也會在患者體內增殖，并殺死具有相應特異性抗原的腫瘤細胞。CAR是一種蛋白質受體，可使T細胞識別腫瘤細胞表面的特定蛋白質(抗原)，表達CAR的T細胞可識別并結合腫瘤抗原，進而攻擊腫瘤細胞。這種表達CAR的T細胞被稱為CAR-T。

表達嵌合抗原受體(CAR)的基因工程T細胞作為一種最有希望的針對血液惡性腫瘤的新治療方法。但CAR-T療法可引起快速而持久的臨床反應，CAR-T細胞易受免疫抑制機制的影響，本專利提出一種名為雙向抗體重組的外泌體(CAR-Exo)的開發，該外體作為細胞免疫的調節劑，可重新定向免疫效應細胞并控制其免疫反應性。。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雙向抗體重組的外泌體及其制備方法，以解決背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種雙向抗體重組的外泌體，該外泌體為CAR-Exos，其包括有兩種抗體，其中一個為具有遺傳編碼的抗人CD3抗體，另一個為具有遺傳編碼的抗人CD38抗體。

優選的，類血小板源性生長因子受體的跨膜域作為融合靶蛋白在外泌體CAR-Exos表面展示CD3抗體和CD38抗體。

優選的，該外泌體CAR-Exos用于治療多發性多發骨髓瘤。

優選的，該外泌體CAR-Exos將人T細胞募集到CD38陽性多發性多發骨髓瘤細胞中。

一種雙向抗體重組的外泌體的制備方法，包括以下制作步驟：

步驟一：每50mL細胞需要準備50μg pDisplay-CD3 scfv-CD38nanobody質粒，用2mL Opti-MEM培養基稀釋質粒，混勻后靜置5分鐘；

步驟二：每50mL細胞需要準備100μL PEI試劑，用2mL Opti-MEM培養基稀釋，混勻后靜置5分鐘；

步驟三：將步驟一、步驟二中試劑混勻靜置15分鐘；

步驟四：3.將試劑加入細胞中，混勻，放置于軌道搖床置于≥80％相對濕度和8％CO2的37℃培養箱內進行培養

步驟五：72h后收集外泌體；

步驟六：收獲的細胞培養的上清液體含有將外泌體在4℃下以100×g離心10分鐘，并以4000×g，離心30分鐘，然后14000×g保持50分鐘；

步驟七：然后收集上清液然后使用0.2μm注射器過濾器過濾后的上清在超高速離心轉子中以200,000×g離心2小時；

步驟八：倒出上清液后，獲得純化后的外泌體。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：產生的雙重靶向T細胞CD3和CD38受體的CAT-Exos可以將人T細胞募集到CD38陽性多發性多發骨髓瘤細胞中，達到靶向治療的目的。

附圖說明