[發(fā)明專(zhuān)利]一種家用型檢測(cè)芹菜過(guò)敏原的高靈敏試劑盒、其檢測(cè)方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011619365.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112834750A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳佳琛;李妍;于秋香;孫錫仕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島普瑞邦生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37277
• 代理人: 王敬花

1.一種家用型檢測(cè)芹菜過(guò)敏原的高靈敏試劑盒，其特征在于，包括：

試紙條：NC膜上的檢測(cè)線上包被鼠抗芹菜單克隆抗體1，濃度為0.1～0.5mg/ml，質(zhì)控線上包被羊抗小鼠IgG，濃度為2～8mg/ml；試紙條由上至下為吸水紙、NC膜，樣品墊，固定于PVC膠板上；其中，吸水紙和樣品墊與NC膜重疊部分為2mm。

金標(biāo)微孔：將芹菜金標(biāo)抗體與凍干稀釋液的混合液加入到低吸附酶標(biāo)板的微孔后進(jìn)行凍干得到；

其中，所述芹菜金標(biāo)抗體是用鏈霉親和素金標(biāo)復(fù)合物和生物素標(biāo)記牛血清白蛋白金標(biāo)復(fù)合物連接的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)來(lái)標(biāo)記生物素化芹菜抗體2而制備得到。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高靈敏試劑盒，其特征在于，還包括用于提取樣品中的芹菜抗原的萃取液，萃取液主要由以下濃度的各組分組成：摩爾濃度為0.05～0.1M的Tris-HCl、質(zhì)量體積濃度為0.5～1.5％的Triton X-100、質(zhì)量體積濃度為0.5～3％的NaCl、體積濃度5～30％的乙醇、質(zhì)量體積濃度為0.01％～0.1％的NaN₃，溶劑為水，pH為9.0。

3.一種芹菜過(guò)敏原的家用型檢測(cè)方法，其特征在于：采用如權(quán)利要求1所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，方法包括以下步驟：

(1)提取待測(cè)樣品中的抗原，得到提取液；

(2)向金標(biāo)微孔中加入3～4滴提取液，吹打多次以完全溶解微孔內(nèi)的粉色粉末，將試紙條MAX端向下插入微孔內(nèi)，10min后根據(jù)試劑條的顯色結(jié)果判斷樣品中是否含有芹菜過(guò)敏原；

判斷依據(jù)為：當(dāng)只有質(zhì)控線顯色時(shí)，判定檢測(cè)結(jié)果為陰性；當(dāng)檢測(cè)線和質(zhì)控線同時(shí)顯色時(shí)，判定檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；當(dāng)質(zhì)控線不顯色，不管檢測(cè)結(jié)果顯色與否，都判定檢測(cè)結(jié)果為無(wú)效。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，由樣品制備提取液的方法為：

將2～4ml萃取液和一個(gè)磁珠加入到5ml小瓶中；向小瓶中直接加入液體樣本或固體樣本后，上下震搖小瓶30s，靜止至少1min后，吸取上清得到提取液；

其中，萃取液主要由以下濃度的各組分組成：摩爾濃度為0.05～0.1M的Tris-HCl、質(zhì)量體積濃度為0.5～1.5％的Triton X-100、質(zhì)量體積濃度為0.5～3％的NaCl、體積濃度5～30％的乙醇、質(zhì)量體積濃度為0.01％～0.1％的NaN₃，溶劑為水，pH為9.0。

5.如權(quán)利要求1所述的家用型檢測(cè)芹菜過(guò)敏原的高靈敏試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)芹菜金標(biāo)抗體的制備：

A、向制備好的膠體金中加入碳酸鉀，混合均勻后，邊攪拌邊加入鏈霉親和素，室溫反應(yīng)1～4h后，再逐滴加入牛血清白蛋白，室溫反應(yīng)1～4h后，離心收集沉淀并用復(fù)溶液重懸，得到鏈霉親和素金標(biāo)復(fù)合物溶液；

B、向制備好的膠體金中加入碳酸鉀，混合均勻后，邊攪拌邊加入生物素標(biāo)計(jì)牛血清白蛋白，室溫反應(yīng)1～4h，再逐滴加入牛血清白蛋白，室溫反應(yīng)1～4h再逐滴加入牛血清白蛋白，反應(yīng)后離心收集沉淀，將沉淀用復(fù)溶液重懸，得到生物素標(biāo)記牛血清白蛋白金標(biāo)復(fù)合物；

C、將前兩步得到的鏈霉親和素金標(biāo)復(fù)合物和生物素標(biāo)記牛血清白蛋白金標(biāo)復(fù)合物以1：3～1:30的比例進(jìn)行混勻，并邊攪拌邊按照8～24ug/ml的比例加入生物素化鼠抗芹菜單克隆抗體2，室溫反應(yīng)1～4h或4度過(guò)夜，得到芹菜金標(biāo)抗體。

(2)金標(biāo)微孔的制備：將芹菜金標(biāo)抗體溶液與凍干稀釋液以1:(10～15)的體積比進(jìn)行混合，將混合液分裝到低吸附酶標(biāo)板中，在冰箱中冷凍過(guò)夜，再進(jìn)行真空冷凍干燥至少20h后，扣合酶標(biāo)板帽，得到金標(biāo)微孔；

(3)試紙條的準(zhǔn)備：由上至下將吸水紙、NC膜，樣品墊和MAX線固定在PVC膠板上，制備得到試紙條；NC膜上檢測(cè)線包被鼠抗芹菜單克隆抗體1，濃度為0.5～2mg/ml，質(zhì)控線包被羊抗小鼠IgG，濃度為1～5mg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，膠體金是采用檸檬酸三鈉還原的方法制備而成。