[發明專利]一種膠原蛋白纖維提取方法

有效

• 申請號: 202011618301.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112625122B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 陳燃
• 申請（專利權）人: 福建紐伯爾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 廈門原創專利事務所(普通合伙) 35101
• 代理人: 郭金華

本發明提供了一種膠原蛋白纖維提取方法，包括以下步驟：S1，取富含膠原纖維的動物組織切成薄片，清洗；S2，將薄片用蛋白酶消化液于35?37℃消化16?20小時；S3，用中性蛋白酶溶液消化22?26小時，磷酸緩沖液洗滌；S4，用酸溶液溶脹18?22小時，攪拌均勻，過濾收集上清液；S5，將上清液用堿性溶液中和10?14小時，透析析出粗膠原蛋白纖維；S6，將粗膠原蛋白纖維用不飽和脂肪酸浸泡4?6小時，清洗；S7，將粗膠原蛋白纖維用雙氧水溶液浸泡12?16小時，清洗；再用丙酮或者異丙醇浸泡6?8小時，清洗；S8，用氯化鈉溶液浸泡12?16小時，清洗、瀝干；再95％酒精浸泡10?14小時，析出膠原蛋白纖維，冷凍保存。該提取方法的提取率高，所提取的膠原蛋白纖維的免疫原性低。

技術領域

本發明涉及一種膠原蛋白纖維提取方法，屬于膠原蛋白的提取技術領域。

背景技術

膠原蛋白是動物結締組織中的含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質總量的25％～30％，某些生物體甚至高達80％以上。膠原蛋白纖維是由膠原蛋白形成的纖維，具有三螺旋結構，在組織的發育、細胞間信息的傳遞、細胞增殖、分化等生理過程中發揮重要作用，而且膠原蛋白纖維具有較佳的組織相容性，細胞適應性和促進細胞增殖的作用，同時其具有生物降解性能，在體內膠原酶的作用下逐漸降解成低分子寡肽或者氨基酸，被集體吸收或排出體外。由于膠原蛋白纖維以上的特殊的生物學優點，其廣泛應用于在化妝品、生物材料等領域。

目前，用于提取膠原蛋白纖維的方法主要有酸提取法、酶提取法、中性鹽提取法和堿提取法等。但是，由于各種原因，這些方法提取膠原蛋白纖維免疫原性較高、提取率較低。

發明內容

本發明提供了一種膠原蛋白纖維提取方法，可以有效解決上述問題。

本發明是這樣實現的：

一種膠原蛋白纖維提取方法，包括以下步驟：

S1，取富含膠原纖維的動物組織切成薄片，清洗；

S2，將薄片用堿性或酸性蛋白酶消化液于35-37℃消化16-20小時；

S3，用中性蛋白酶溶液消化22-26小時，磷酸緩沖液洗滌；

S4，用酸溶液溶脹18-22小時，攪拌均勻，過濾收集上清液；

S5，將上清液用堿性溶液中和10-14小時，透析析出粗膠原蛋白纖維；

S6，將粗膠原蛋白纖維用不飽和脂肪酸浸泡4-6小時，清洗；

S7，將粗膠原蛋白纖維用雙氧水溶液浸泡12-16小時，清洗；再用丙酮或者異丙醇浸泡6-8小時，清洗；

S8，用氯化鈉溶液浸泡12-16小時，清洗、瀝干；再95％酒精浸泡10-14小時，析出膠原蛋白纖維，冷凍保存。

作為進一步改進的，所述堿性或酸性蛋白酶消化液按照質量分數包括堿性或酸性蛋白酶0.5-1％、谷氨酸1-2％、脫氫乙酸鈉0.01-0.05％、乙二胺四乙酸二鈉0.01-0.05％、乙二胺四乙酸四鈉0.01-0.05％。

作為進一步改進的，所述堿性或酸性蛋白酶為胰蛋白酶、無花果蛋白酶或者胃蛋白酶。

作為進一步改進的，所述中性蛋白酶為DispaseII。

作為進一步改進的，所述中性蛋白酶溶液的終濃度為2.5U/mL。

作為進一步改進的，所述酸為丙二酸、檸檬酸或醋酸。

作為進一步改進的，所述酸溶液按照質量分數計包括酸0.1-0.5％及脫氫乙酸鈉0.01-0.05％。

作為進一步改進的，所述堿溶液為0.5-1mol/L的氫氧化鈉溶液。