[發明專利]一種基因組DNA室溫保存卡及其制作方法與應用

在審

• 申請號: 202011618073.9
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112662661A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 朱偉;雷琪;周亮
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 陳智英

1.一種基因組DNA室溫保存卡，其特征在于，包括具有液體吸收性能的介質和細胞保存液體預混劑。

2.根據權利要求1所述的基因組DNA室溫保存卡，其特征在于，所述的介質包括但不限于濾紙、硝酸纖維素膜、尼龍膜、玻璃纖維素膜和硅膠膜中的至少一種；

所述的具有液體吸收性能的介質為經過氨基化試劑處理的介質，即氨基化的具有液體吸收性能的介質；

所述的介質經過氨基化試劑處理的方法為：將介質與氨基化試劑按照10～50μL氨基化試劑/cm²介質的比例混合，于密封條件下共孵育30min，然后取出氨基化的介質于0～80℃至完全干燥，即得具有液體吸收性能的介質；

所述的具有液體吸收性能的介質還可以經過核酸酶抑制劑、抗氧化抑制劑和/或其他能夠使病原菌和病毒蛋白變性的試劑處理；

所述的細胞保存液體預混劑，包括如下按重量份計的各組分：0～200份抗凝血劑，0～200份細胞穩定劑，1～200份反應型細胞包封劑，0.1～200份pH調節劑，0.1～200份離子濃度調節劑和500～1000份無RNase純化水。

3.根據權利要求1所述的基因組DNA室溫保存卡，其特征在于，

所述的抗凝血劑為0～150份；

所述的抗凝血劑為枸櫞酸鈉、檸檬酸鈉、肝素鈉、肝素鋰、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸三鉀和乙二胺四乙酸二鈉中的至少一種；

所述的細胞穩定劑為1～200份；

所述的細胞穩定劑為甘油、羥乙基淀粉、羧甲基纖維素鈉、二甲亞砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜堿中的至少一種。

4.根據權利要求1所述的基因組DNA室溫保存卡，其特征在于，

所述的反應型細胞包封劑為1～100份；

所述的反應型細胞包封劑為可形成納米層的化合物；

所述的納米層為貴金屬納米層、硅納米層、鈦納米層、有機納米層和有機-無機雜化納米層中的至少一種；

所述的反應型細胞包封劑為可形成貴金屬納米層的四氯合金酸、四氯合金酸鉀、六氯合鉑酸、六氯合鉑酸鉀、三氯氨鉑酸鉀、四氯鉑酸鉀、六溴鉑酸鉀；可形成硅納米層的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、雙(三甲基硅烷基)乙酰胺、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巰丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、環己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、芐基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、異丁基三乙氧基硅烷；可形成鈦納米層的四異丙基鈦酸酯、鈦酸甲酯、鈦酸四乙酯、鈦酸四丁酯、鈦酸四丙酯；可形成其他無機納米層的異丙醇鋁、鋯酸四丁酯和能夠形成有機納米層的多巴胺、鞣酸中的至少一種。

5.根據權利要求1所述的基因組DNA室溫保存卡，其特征在于，

所述的pH調節劑為0.1～100份；

所述的pH調節劑為鹽酸、醋酸、磷酸、硫酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水和三羥甲基氨基甲烷中的至少一種；

所述的離子濃度調節劑為0.1～180份；

所述的離子濃度調節劑為氯化鈉、氯化鉀、氯化銨、磷酸鈉、磷酸一氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鉀、磷酸一氫鉀、磷酸二氫鉀和醋酸鈉中的至少一種。

6.權利要求1-5任一所述的基因組DNA室溫保存卡的制作方法，包括如下步驟：

(1)將抗凝血劑、細胞穩定劑、反應型細胞包封劑、pH調節劑、離子濃度調節劑和無RNase純化水混合均勻，即得細胞保存液體預混劑；

(2)將該細胞保存液體預混劑與待保存細胞樣本混合并孵育，得到表面包有包封劑的液體基因組原位包封樣本，然后將所得液體基因組原位包封樣本滴加于具有液體吸收性能的介質上，待其干燥后可在室溫長期保存，即得基因組DNA室溫保存卡。

7.根據權利要求6所述的制作方法，其特征在于，

步驟(2)中所述的細胞保存液體預混劑與待保存細胞樣品按10⁴～10⁹個細胞/mL細胞保存液體預混劑計算；

步驟(2)中所述的共孵育為溫度-197～37℃，時間為1min～168h。