[發(fā)明專利]一種用于肝癌診斷的生物標(biāo)志物及其檢測方法

有效

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• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112763714B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳永強;牛國平;鄭璐;王立新;王露;滿忠松;陳艷紅;王杜平
• 申請（專利權(quán)）人: 徐州市中心醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 李靜

本發(fā)明涉及一種用于肝癌診斷的生物標(biāo)志物，該生物標(biāo)志物為HSP90α⁺EpCAM⁺EVs。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，肝癌胸腹水及肝癌患者外周血中HSP90α⁺EpCAM⁺EVs的比例顯著高于非癌性胸腹水和健康人，該生物標(biāo)志物的檢測方法：收集肝癌患者和健康人EDTA抗凝的外周血或胸腹水，離心得到細(xì)胞外囊泡富集物后，加入含1％BSA的PBS溶液重懸沉淀，再加入抗EpCAM的抗體和抗HSP90α的抗體，混勻并室溫孵育，采用流式細(xì)胞儀檢測HSP90α⁺EpCAM⁺EVs的比例。通過HSP90α⁺EpCAM⁺EVs的比例的高低，可用于肝癌的的早期診斷或是預(yù)后評估，對臨床肝癌診斷、療效檢測和預(yù)后評估具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于肝癌診斷的生物標(biāo)志物及其檢測方法。

背景技術(shù)

肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，在我國其發(fā)病率和死亡率分別位居惡性腫瘤的第4位和第2位。由于肝細(xì)胞癌臨床缺乏特異性早期篩查標(biāo)志物、加上病情進展迅速，因此病人確診時大多處于中晚期而失去有效的治療，導(dǎo)致總體5年生存率僅為7-10％，且治療結(jié)果及預(yù)后差異較大。因此，尋找肝癌液體活檢的早期診斷或預(yù)測不同治療手段的獲益人群的標(biāo)志物，為后期及時選擇合理的后續(xù)治療方案，提高患者生存率是目前肝癌研究的熱點。

細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)，包括：外泌體、微泡和凋亡小體等，是細(xì)胞間重要的信號傳遞媒介。腫瘤細(xì)胞來源的EVs因富含腫瘤細(xì)胞相關(guān)信息，包括各種蛋白配體、脂質(zhì)和非編碼RNAs等生物活性物質(zhì)，不僅參與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸，同時還可以作為潛在的腫瘤診療標(biāo)志物。以往研究發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞粘附分子(Epithelial celladhesion molecule,EpCAM)表達(dá)于人類部分正常上皮細(xì)胞和大多數(shù)上皮來源的惡性腫瘤細(xì)胞表面，其表達(dá)水平與患者預(yù)后密切相關(guān)，可作為腫瘤診斷的潛在標(biāo)志物，另一方面，HSP90α是細(xì)胞內(nèi)的分子伴侶蛋白，除了輔助細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的折疊、成熟和轉(zhuǎn)運外，HSP90α可通過非傳統(tǒng)的分泌途徑釋放至細(xì)胞外并參與細(xì)胞內(nèi)自噬及IL-1β的自噬分泌，且發(fā)現(xiàn)血漿Hsp90α濃度與肝癌的發(fā)生及進展有良好相關(guān)性。

目前尚無采用胸腹水或血漿中HSP90α和EpCAM雙陽性的細(xì)胞外囊泡(HSP90α⁺EpCAM⁺EVs)作為肝癌診斷生物標(biāo)志物的文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中肝癌早期診斷技術(shù)的不足，提供一種用于肝癌診斷的生物標(biāo)志物。

技術(shù)方案

一種用于肝癌診斷的生物標(biāo)志物，所述生物標(biāo)志物為HSP90α⁺EpCAM⁺EVs。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，肝癌胸腹水及肝癌患者外周血中HSP90α⁺EpCAM⁺EVs的比例分別為(16.45％±8.34％)和(11.09％±5.45％)顯著高于非癌性胸腹水(2.64％±1.09％)和健康人(4.48％±1.99％)，胸腹水和血漿總的細(xì)胞外囊泡中HSP90α⁺EpCAM⁺EVs比例高低可作為肝癌患者潛在的液體活檢診斷標(biāo)志物。

上述生物標(biāo)志物的檢測方法，包括如下步驟：

(1)收集肝癌患者和健康人EDTA抗凝的外周血或胸腹水；

(2)離心，得到的沉淀為細(xì)胞外囊泡富集物；