[發(fā)明專利]一種全血基因組DNA保存劑及其制備方法與應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011616524.5
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112575063A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設計）人: 朱偉;雷琪;周亮
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 陳智英

1.一種全血基因組DNA保存劑，其特征在于，包括如下按重量份計的組分：1～200份抗凝血劑，1～200份血細胞穩(wěn)定劑，1～200份反應型細胞包封劑，0.1～200份pH調節(jié)劑，0.1～200份離子濃度調節(jié)劑和500～1000份無RNase純化水。

2.根據(jù)權利要求1所述的全血基因組DNA保存劑，其特征在于，所述的抗凝血劑為1～150份；

所述的抗凝血劑為枸櫞酸鈉、檸檬酸鈉、肝素鈉、肝素鋰、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸三鉀和乙二胺四乙酸二鈉中的至少一種；

所述的血細胞穩(wěn)定劑為2～200份；

所述的血細胞穩(wěn)定劑為甘油、羥乙基淀粉、羧甲基纖維素鈉、二甲亞砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜堿中的至少一種；

所述的反應型細胞包封劑為1～100份；

所述的反應型細胞包封劑為可形成納米層的化合物；所述的納米層為貴金屬納米層、硅納米層、鈦納米層、有機納米層和有機-無機雜化納米層中的至少一種。

3.根據(jù)權利要求1所述的全血基因組DNA保存劑，其特征在于，所述的反應型細胞包封劑為可形成貴金屬納米層的四氯合金酸、四氯合金酸鉀、六氯合鉑酸、六氯合鉑酸鉀、三氯氨鉑酸鉀、四氯鉑酸鉀、六溴鉑酸鉀；可形成硅納米層的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、雙(三甲基硅烷基)乙酰胺、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巰丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、環(huán)己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、芐基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、異丁基三乙氧基硅烷；可形成鈦納米層的四異丙基鈦酸酯、鈦酸甲酯、鈦酸四乙酯、鈦酸四丁酯、鈦酸四丙酯；可形成其他無機納米層的異丙醇鋁、鋯酸四丁酯和能夠形成有機納米層的多巴胺、鞣酸中的至少一種；

所述的pH調節(jié)劑為0.1～100份；

所述的pH調節(jié)劑為鹽酸、醋酸、磷酸、硫酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水和三羥甲基氨基甲烷中的至少一種；

所述的離子濃度調節(jié)劑為0.1～180份；

所述的離子濃度調節(jié)劑為氯化鈉、氯化鉀、氯化銨、磷酸鈉、磷酸一氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鉀、磷酸一氫鉀、磷酸二氫鉀和醋酸鈉中的至少一種。

4.一種全血基因組DNA保存劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求1-4任一所述的抗凝血劑、血細胞穩(wěn)定劑、反應型細胞包封劑、pH調節(jié)劑、離子濃度調節(jié)劑和無RNase純化水混合，即得全血基因組DNA保存劑。

5.權利要求1-3任一所述的全血基因組DNA保存劑在全血基因組DNA的長期常溫保存和提取中的應用。

6.一種全血基因組DNA的長期常溫保存方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求1-4任一所述的全血基因組DNA保存劑與全血共孵育，得到基因組原位包封樣本，之后將基因組原位包封樣本置于室溫即可長期保存。

7.根據(jù)權利要求6所述的全血基因組DNA的長期常溫保存方法，其特征在于，所述的全血基因組DNA保存劑與全血按體積比100:1～100計算；

所述的共孵育為溫度-197～37℃；時間為5min～168h。

8.一種全血基因組DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：將上述用全血基因組DNA保存劑長期保存的基因組原位包封樣本外部的包封劑降解掉，然后用基因組總DNA提取試劑盒提取基因組DNA。

9.根據(jù)權利要求8所述的全血基因組DNA的提取方法，其特征在于，所述的降解包封劑的試劑包括酸、堿、緩沖液和螯合劑中的至少一種。

10.權利要求6或7所述的全血基因組DNA的長期常溫保存方法和/或權利要求8或9任一所述的全血基因組DNA的提取方法在疾病預防和疾病治療以及法醫(yī)刑偵領域中的應用。