[發(fā)明專利]一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011611308.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN113189211A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳澤君;陳珉珉;李洪權(quán);唐小鵬;董華貴;吳茜;符春花;彭怡心
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 株洲市食品藥品檢驗(yàn)所;湖南省仙泉自然生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 長(zhǎng)沙朕揚(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 楊斌

1.一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，包含以下步驟：

1)根據(jù)無(wú)患子皂苷特征性成分系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜分析得出無(wú)患子皂苷特征性成分的色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

2)制備待測(cè)樣品溶液；

3)基于步驟2)中制備的溶液，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法檢測(cè)待測(cè)溶液；

4)根據(jù)步驟3)中檢測(cè)得到的色譜峰面積和步驟1中建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得到待測(cè)樣品中無(wú)患子皂苷特征性成分的濃度，根據(jù)測(cè)試得到的待測(cè)樣品中無(wú)患子皂苷特征性成分濃度換算成待測(cè)樣品中皂苷特征性成分的含量，并據(jù)此判斷待測(cè)樣品的質(zhì)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述無(wú)患子皂苷特征性成分包含皂苷Rarasaponin III、皂苷Sapinmusaponion M及無(wú)患子三萜總皂苷中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，當(dāng)待測(cè)樣品中皂苷Rarasaponin III、皂苷Sapinmusaponion M分別占無(wú)患子三萜總皂苷含量的10％-20％和3％-10％時(shí)，表示待測(cè)樣品中無(wú)患子三萜類皂苷成分分布比例符合規(guī)定要求。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟3)中高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定時(shí)的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)包括：準(zhǔn)備色譜柱；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B；梯度洗脫程序?yàn)椋?～15min，25～40％A；15～35min，40～43％A；35～45min，43～50％A；45～50min，100％A；流速0.9-1.1mL/min，柱溫25-40℃；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：漂移管溫度95-115℃，載氣流速2.5-3.5mL/min，進(jìn)樣量10μL；理論板數(shù)按參照峰Rarasaponin III計(jì)算不低于5000。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述的色譜柱為Agilent Eclipse plus C18或Welch Xtimate C18或Welch Ultimate C18或其它等效十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，柱型為4.6mm×250mm，5μm。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任意一項(xiàng)所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟1)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為lnA＝KlnC+B；

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中C表示待測(cè)樣品溶液濃度，A表示測(cè)得的色譜峰面積，K為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，B為標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟1)的色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制過程中，所述系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為10-1000μg/mL，至少覆蓋一個(gè)數(shù)量級(jí)，且除空白溶液外還包含至少5個(gè)濃度點(diǎn)，相關(guān)系數(shù)R²不低于0.99。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟1)中建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的步驟為：稱取無(wú)患子皂苷特征性成分對(duì)照品適量，置容量瓶中，用甲醇超聲溶解，定容，搖勻，制成每1mL含1000μg的溶液，用濾膜過濾，取續(xù)濾液，稀釋成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液；對(duì)系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，得無(wú)患子皂苷特征性成分標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖；以峰面積A的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，濃度C的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟2)制備待測(cè)樣品溶液包括以下步驟：取無(wú)患子果皮，干燥，粉碎成細(xì)粉，稱取0.5-1.5g，加入6-70mL的提取溶劑超聲提取15-45min，或取無(wú)患子皂苷提取物原料0.05-0.2g，加入6-70mL的甲醇或乙醇，超聲提取5min-15min，冷卻定容至10-100mL量瓶，用濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種無(wú)患子三萜類皂苷成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述提取溶劑為甲醇或者乙醇或者水。