[發(fā)明專利]利用三水相體系自發(fā)調(diào)控水解生成特定分子量的α-葡聚糖的方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011609921.X
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN114686544A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黎志德;劉桂云;梁達(dá)奉;柳穎;張九花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省科學(xué)院生物工程研究所
• 主分類號(hào): C12P19/08
• 分類號(hào): C12P19/08
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運(yùn)貞

1.一種利用三水相體系自發(fā)調(diào)控水解生成特定分子量的α-葡聚糖的方法，其特征在于，包括如下步驟：

取聚丙二醇、聚乙二醇PEG4000和α-葡聚糖的混合液，震蕩混合，靜置分層，從上到下分成三層，上相為聚丙二醇相、中相為聚乙二醇相、下相為α-葡聚糖相，將α-葡聚糖酶加入到中相與下相接近兩相界面處，輕微震蕩后，保溫，觀察到中下相開始混合后，離心，此時(shí)液體分成上下兩相，取下相，加入酒精，離心，取沉淀即為目標(biāo)低分子量α-葡聚糖；向上述上相液體中加入硫酸鎂溶液，震蕩后靜置分層得到兩相，上相為聚丙二醇相，下相為鹽溶液相，取下相，超濾脫鹽濃縮后，獲得α-葡聚糖酶回收液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚丙二醇、聚乙二醇PEG4000和α-葡聚糖的混合液中，聚丙二醇、聚乙二醇PEG4000和α-葡聚糖按質(zhì)量比6.5～9:4～8:12～17；

所述的聚丙二醇、聚乙二醇PEG4000和α-葡聚糖的混合液中，α-葡聚糖由保藏編號(hào)為GDMCC1.473的腸膜明串珠菌通過(guò)搖瓶單批發(fā)酵制備得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚丙二醇、聚乙二醇和α-葡聚糖的混合液的溶劑為乙酸-乙酸鈉緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶的加入量按總反應(yīng)體系每增加1％的α-葡聚糖，α-葡聚糖酶的最終加入量則增加0.0005～0.0015U/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶來(lái)源于菌和商業(yè)購(gòu)買中的至少一種；所述的α-葡聚糖酶來(lái)源于菌時(shí)，所述的α-葡聚糖酶來(lái)源于保藏編號(hào)CCTCC No：M2013096的畢赤酵母工程菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶的酶活為0.5～1.5U/mL；

所述的保溫的溫度為40～50℃；

所述的離心的條件為：4000～6000rpm離心4～6min；

所述的酒精為80％～95％v/v的酒精。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的下相和酒精中酒精的終濃度為70％～90％v/v；

所述的加入酒精后離心的條件為：4000～6000rpm離心4～6min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述的硫酸鎂溶液中硫酸鎂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％～36％w/w。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述的上相液體和硫酸鎂溶液形成的體系中硫酸鎂的加入量為體系的14％～15％w/w。

10.權(quán)利要求1-9任一所述的利用三水相體系自發(fā)調(diào)控水解生成特定分子量的α-葡聚糖的方法在食品和藥品中的應(yīng)用。