[發明專利]細胞-多肽偶聯物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011609724.8
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN114686428A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 胡俊;楊哲;周麗紅;高建偉
• 申請（專利權）人: 北京康明海慧生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/00;C07K14/00;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 杜仙;劉海羅

本發明提供一種細胞?多肽偶聯物及其制備方法和應用，具體地，本發明提供一種細胞?多肽偶聯物，其包含免疫效應細胞以及共價連接至所述免疫效應細胞膜表面的特異性結合gp96的多肽。所述細胞?多肽偶聯物可顯著提高NK細胞對腫瘤細胞(尤其是肝癌細胞或三陰乳腺癌細胞)的殺傷效果。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種細胞-多肽偶聯物、其制備方法、及其在抗腫瘤中的應用。

背景技術

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(Her-2)均為陰性的乳腺癌，約占乳腺癌病理類型的15％-20％。三陰性乳腺癌預后差、危害大，目前臨床上沒有相應的靶向藥物，僅放化療有一定療效。

NK細胞作為天然免疫的重要組成部分，對腫瘤細胞具有直接的殺傷作用，并通過分泌細胞因子和趨化因子發揮免疫調節功能。與T細胞不同，NK細胞發揮殺傷活性不需要腫瘤細胞表達腫瘤抗原，并且對低表達或不表達MHC分子的腫瘤細胞殺傷活性更強。

過繼性回輸同種異體NK細胞已經在臨床試驗中用于血液類腫瘤(淋巴瘤、急性白血病等)和多種實體瘤(晚期胃癌和結直腸癌、胃腸部腫瘤的肝轉移和兒童復發、難治性神經母細胞瘤等)的治療，具有很好的安全性，不會引起移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease，GVHD)，但是僅具中等的治療效果。可能的原因是NK細胞缺乏靶向性以及腫瘤浸潤不足。為了提高NK細胞的靶向殺傷活性，目前的研究主要通過病毒載體構建靶向腫瘤抗原的CAR-NK細胞，但是即使采用慢病毒感染的方法，原代NK細胞的CAR載體轉染效率依然低下；且病毒載體具有一定的安全隱患；CAR-NK制備周期較長，費用高昂。

因此，開發一種非轉染的方式，提供特異性靶向殺傷三陰性乳腺癌的NK細胞的方法是目前的研究熱點。

發明內容

本發明通過對NK細胞膜表面修飾特異性靶向gp96的多肽得到一種細胞-多肽偶聯物，其可顯著提高NK細胞對腫瘤細胞(尤其是肝癌細胞或三陰乳腺癌細胞)的殺傷效果。

細胞

本發明提供一種細胞-多肽偶聯物，包含免疫效應細胞以及共價連接至所述免疫效應細胞膜表面的特異性結合gp96的多肽。

所述免疫效應細胞為T細胞、NK細胞或巨噬細胞。在一些實施方案中，所述效應細胞為NK細胞。

本領域技術人員將理解，從人組織獲得的原代細胞和現有細胞系兩者均適用于工程化以獲得本發明的細胞-多肽偶聯物。例如，在一些實施方案中，所述NK細胞可來源于從受試者(如人)獲得的原代細胞。

在一些實施方案中，原代NK細胞群可從哺乳動物受試者(如人受試者)的樣品獲得。所述樣品或來源可以是臍帶血、骨髓或外周血。

在一些方面，從所述細胞群分離表達一種或多種NK細胞特異性標記物的NK細胞。分離和鑒定NK細胞的方法是本領域熟知的，并且包括在Da hl be rg等人，Frontiers inImmunology，第6卷第605條第1-18頁(2015)中討論的那些方法。

在一些實施方案中，NK細胞可被鑒定為表達典型人NK細胞標記物(如KIR、NKG2A、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、CD56和CD161)的那些細胞。

在一些實施方案中，可使用陽性或陰性選擇來選擇性地富集NK細胞。例如，可通過將細胞混合物暴露于固定的抗CD3抗體并除去未結合細胞來選擇不表達CD3的NK細胞。根據本發明的一些實施方案，NK細胞包括CD56+CD3-細胞。根據本發明的一些實施方案，NK細胞包括CD56+CD16+CD3-細胞。