[發明專利]一種自然共生的混合培養物發酵粗飼料生產內切葡聚糖酶的方法

有效

• 申請號: 202011609040.8
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112725314B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 魏亞琴;毛婷;王治業
• 申請（專利權）人: 甘肅省科學院生物研究所
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/01;C12R1/645
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種自然共生的混合培養物YakQH5發酵生產內切葡聚糖酶的方法，其特征在于，所述的混合培養物YakQH5由厭氧真菌(Neocallimastix frontalis)和甲烷菌(Methanobrevibacter gottschalkii)組成，所述的方法包括如下步驟：

(1)混合培養物YakQH5菌劑的制備：以10％v/v接種量向以小麥秸稈為底物的厭氧培養基中接入混合培養物YakQH5，加入復合抗生素，厭氧培養即得到高活力的菌劑；

(2)生產內切葡聚糖酶：吸取步驟(1)所得菌劑，以10％v/v接種量接入含有1％w/v底物的厭氧培養基中，加入1％v/v復合抗生素厭氧培養；

所述的混合培養物YakQH5于2020年3月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.19299，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，電話：[phone]；

所述的步驟(1)中厭氧培養的溫度為39℃，時間為72小時；所述的步驟(2)中厭氧培養的溫度為39℃，時間為5天；

所述的復合抗生素為青霉素鈉和硫酸鏈霉素，在厭氧培養基中的濃度分別為1600IU/mL和2000IU/mL；

厭氧培養基配方為：酵母膏1.0g，蛋白胨1.0g，NaHCO₃ 7.0g，刃天青1.0g/L 1mL，L-半胱氨酸鹽酸鹽1.7g，晨飼前采集瘤胃液8000×g，4℃離心20min后的上清170mL，鹽溶液Ⅰ82.5mL，鹽溶液II 16.5mL，蒸餾水定容至1000mL；所述的鹽溶液I配制步驟如下：NaCl 6g，(NH₄)₂SO₄ 3g，KH₂PO₄ 3g，CaCl₂·2H₂O 0.4g，MgSO₄·2H₂O 0.6g，蒸餾水定容至1000mL；所述的鹽溶液II配制步驟如下：4g K₂HPO₄，蒸餾水定容至1000mL；

所述的步驟(2)分別加入各種底物后除氧，充入二氧化碳，高溫高壓滅菌；

所述的步驟(2)加入的底物分別為小麥秸稈、玉米秸稈、水稻秸稈、燕麥秸稈、黃豆秸稈、胡麻秸稈、麩皮、番茄渣、花生殼和小麥殼中的一種或幾種。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(2)加入的底物為小麥殼。