[發明專利]親和Clec9a的多肽及其應用

有效

• 申請號: 202011608182.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112724199B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 高艷鋒;柳雯雯;茍閃閃;王帥;翟文杰;祁元明
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;A61K39/385;A61P37/04
• 代理公司: 鄭州亦鼎知識產權代理事務所(普通合伙) 41188
• 代理人: 張夏謙

本發明屬于免疫治療和免疫預防領域，具體涉及一種靶向Clec9a的親和肽的制備及其應用。該親和肽選自SEQ ID NO.2所示肽或突變肽或其N端或C端截短肽。本發明獨辟蹊徑，通過反復篩選、優化得到的肽，能很好地親和到Clec9a靶蛋白上，并能夠顯著增強抗原引起的免疫反應。

技術領域：

本發明屬于免疫治療和免疫預防領域，具體涉及一種靶向Clec9a的親和肽，其制備及其應用。

背景技術：

免疫治療由于能夠激活機體的自身免疫，形成免疫記憶和免疫循環成為一種重要的治療方法。樹突狀細胞(DCs)作為一類最重要的參與T淋巴細胞應答的抗原遞呈細胞，在免疫反應中起著關鍵作用。DCs是介導T細胞和B細胞免疫應答的專職抗原遞呈細胞。與其他的抗原遞呈細胞(APC)相比，DCs是已知捕獲、加工和遞呈抗原能力最強，也是唯一能活化初始T細胞的專職抗原遞呈細胞，可以誘導強有力的特異性的免疫反應，因此針對DC的免疫治療是一種備受矚目且非常有效的免疫治療策略。

在人和鼠中至少可以分為3類DC：類漿細胞DC(pDC)，血液來源的傳統的DC(cDC)和組織來源的DC(cDC)。這3類DC根據膜表面分子、功能和來源又可以分為不同的DC亞群。不同DC亞群分化表面標志物為抗原靶向治療提供了理論基礎，為增強疫苗的效果提供了保障。根據DC細胞表面標志物的不同可分為：CD1c⁺DCs(BDCA1⁺DCs)，Clec4c⁺DCs(BDCA2⁺DCs)和CD141⁺DCs(BDCA3⁺DCs)。不同亞群的DC具有不同的功能，其中人源的CD141⁺DCs亞群為鼠源的CD8α⁺DC亞群的等價物，相較于其他DC亞群，這類DC的MHC I交叉遞呈能力更強，能夠遞呈細胞相關外源蛋白或自身抗原給CD8⁺T細胞，產生強烈的特異性的CTL反應。

目前研究DC疫苗的策略主要是利用抗體靶向DC表面特異性受體。目前研究最廣泛的DC膜受體是C型凝集素受體，如Clec9a(C-type Lectin domain family 9A)，而Clec9a則選擇性表達在交叉遞呈能力比較強的CD141⁺DC上。

已有研究表明，抗原靶向Clec9a可引發全面的免疫反應，因而通常都是將抗原與Clec9a抗體進行化學偶聯以此來增強抗原的免疫反應，但抗體-抗原復合物存在分子量大，組織滲透性差，生產成本高等問題，因而迫切需要一種能替代Clec9a抗體的靶向hClec9a(h縮寫在本領域表示人)的高親和多肽載體，來達到增強抗原的免疫反應和免疫預防的效果。

發明內容：

本發明獨辟蹊徑，通過反復篩選、優化得到一種親和Clec9a的肽，該親和肽能夠顯著增強抗原的免疫反應，在免疫治療和預防中具有很好的應用前景。

第一方面，本發明提供一種Clec9a的親和肽，其選自下述肽或其組合：

SEQ ID NO.2所示多肽，或其第11位氨基酸發生點突變替換為其他氨基酸的突變肽，其N端或C端截短肽，所述截短肽的氨基酸數目為5、6、7、8、9、10或11個。截短肽，在本領域指從多肽母體的N端或C端截去1至多個后得到的一系列更短的肽，如SEQ ID NO.2所示多肽的C端截去1氨基酸得到的截短肽，序列為SEQ ID NO.4。

任選地，所述點突變選自如下突變：

Lys突變為Arg、Trp、Ala、Leu、Asn、Tyr、Ile、Asp、Glu、Cys、Thr、Ser或Val。任選地，所述截短肽為SEQ ID NO.2所示多肽的N端截短肽，其氨基酸數目為5、6、7、8、9、10或11個。

任選地，所述親和肽的序列選自SEQ ID NOs：1-11(NOs在本領域表示序列號的并列列舉，即序列號為1-11之間的任一個整數)。