[發明專利]重組人胰島素前體的酶切轉換方法

在審

• 申請號: 202011607271.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112625116A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 聶洪霞;劉海峰;黃菁;許波;呂曉林;張金迪;解福生;郝向慧
• 申請（專利權）人: 華潤昂德生物藥業有限公司;上海昂德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62;C12P21/06
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.一種重組人胰島素前體的酶切轉換方法，其特征在于，包括：(1)將初步純化的重組人胰島素前體溶液加入緩沖液進行濃度和pH值的調整得到酶切反應底物混合液；(2)向酶切反應底物混合液中加入重組賴氨酰肽內切酶進行重組人胰島素前體的酶切轉換反應。

2.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(1)中將初步純化獲得的重組人胰島素前體溶液中前體蛋白濃度控制為8-25mg/ml；優選的，控制前體蛋白濃度為15-20mg/ml。

3.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(1)中所述的緩沖液是碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液或Tris-鹽酸緩沖液中的任意一種。

4.按照權利要求3所述的酶切轉換方法，其特征在于，所述的緩沖液是硼砂-氫氧化鈉緩沖液。

5.按照權利要求3或4所述的酶切轉換方法，其特征在于，所述緩沖液的濃度是0.01-0.05mol/L；優選的，所述緩沖液的濃度為0.02-0.035mol/L；最優選的，所述緩沖液的濃度為0.025mol/L。

6.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(1)中控制酶切反應底物混合液的pH值為8-10.5；優選的，控制酶切反應底物混合液的pH值為9-10。

7.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(1)中將酶切反應底物混合液中重組人胰島素前體蛋白的終濃度控制為0.02-0.03mol/L。

8.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，按照w/w計，控制重組賴氨酰肽鏈內切酶：重組人胰島素前體的比例為1:15000-1:500；優選的，控制重組賴氨酰肽鏈內切酶：重組人胰島素前體的比例為1:15000-1:1000；最優選的，控制重組賴氨酰肽鏈內切酶：重組人胰島素前體的比例為1:15000-1:2000。

9.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(3)中所述的酶切轉換反應的酶切反應的溫度為15-30℃，優選的，酶切反應溫度為20-25℃。

10.按照權利要求1所述的酶切轉換方法，其特征在于，步驟(3)中所述的酶切轉換反應的酶切反應時間為12-48h；優選的，酶切反應時間為18-24h。