[發明專利]一種非洲豬瘟病毒p54蛋白抗原表位肽及其應用

在審

• 申請號: 202011607069.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112724203A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 王愛萍;張改平;陳玉梅;蔣敏;劉燕凱;周景明;王彥偉;馮景
• 申請（專利權）人: 鄭州大學;河南中澤生物工程有限公司
• 主分類號: C07K14/01
• 分類號: C07K14/01;C07K16/08;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發明涉及一種非洲豬瘟病毒p54蛋白抗原表位肽及其應用。本發明篩選出了新的非洲豬瘟病毒p54蛋白抗原表位，完成了對p54蛋白N端B細胞表位的鑒定，完善了p54蛋白的抗原表位圖譜。本發明篩選出的抗原表位(²DSEFFQPV⁹)為首次發現，在非洲豬瘟各毒株之間高度保守，對ASFV的血清學檢測具有重要意義。該抗原表位肽及由其衍生的具有同等功能的抗原表位肽能夠用于制備非洲豬瘟病毒p54蛋白的特異性抗體、制備檢測或鑒定ASFVp54蛋白的試劑，并為研發預防和/或治療非洲豬瘟病毒感染疫苗奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種非洲豬瘟病毒p54蛋白抗原表位肽及其應用。

背景技術

非洲豬瘟病毒(ASFV)是一種巨大而復雜的DNA病毒，是非洲豬瘟(ASF)的病原體。ASF是一種在家豬和野豬中高度傳染性的出血性疾病，近年來造成了巨大的經濟損失。在不同宿主中由病毒的不同毒力引起的臨床體征和死亡率各不相同。在家豬和野豬中，由高毒力分離株引起的感染會導致急性形式的ASF，其發病率和死亡率高達100％。中度或低毒性的病毒以亞急性和慢性形式產生較弱的臨床體征，但存活時間更長。非洲野豬(疣豬，叢林豬和大森林豬)可以被感染而沒有任何臨床癥狀，因此可以充當貯藏庫。此外，鈍緣蜱屬的軟壁虱也是ASFV的天然宿主和貯藏庫。這些動物被認為是進一步入侵的來源，并在ASFV的快速傳播和流通中發揮重要作用。最近在從中國綿羊和牛身上收集的革蜱屬的硬壁虱中發現了一種新的ASFV變異株，從而擴大了ASFV的載體和宿主。鑒于這種跨界動物疾病(TAD)的重要性，它已被列入世界動物衛生組織(OIE)陸生動物衛生法典，并且是必須向OIE報告的疾病。

該疾病的爆發給那些受感染的地區帶來了沉重負擔，并給未受感染的地區構成了威脅。 ASF于1921年首發于非洲肯尼亞。在1957年之前，它僅在撒哈拉以南地區循環。1957年至 1960年，ASF第一次跨洲際蔓延到了歐洲，后來又擴散到了南美和加勒比海地區。由于采取了有效的生物安全措施，90年代中期，大多數受感染地區清除了ASFV。然而，在2007年，一種來自南非的高毒力，Ⅱ型ASFV毒株第二次跨洲際傳播到佐治亞州，隨后迅速傳播到俄羅斯和幾個鄰國，并繼續在這些地區流通。目前，ASF已遍布非洲，亞洲和歐洲的多個國家。值得注意的是，2018年8月3日，我國農業和農村事務部(MARA)確認了中國境內ASF 的首次爆發。其后，在不到兩個月的時間內迅速傳播到全國多個省份。最近，MARA在云南省又確認了一次新的ASF疫情。隨著其在中國的傳播，ASF對世界養豬業的危害和威脅也越來越大。

表位是病毒結構蛋白的重要抗原元件，一般為3～20氨基酸序列，在誘導機體體液免疫和細胞免疫反應中發揮重要作用。根據它們各自的受體不同，表位可以分類為B細胞表位和 T細胞表位，同時根據結構不同，表位又分為線性表位和構象表位。表位的研究對于完善病毒蛋白結構及病毒與宿主作用關系的研究意義重大，同時對病毒的檢測，表位疫苗的制備提供材料基礎，應用價值巨大。

先前的報道表明，p72，p30和p54是感染過程中最具抗原性的三種蛋白質。病毒結構蛋白p54由E183L基因編碼，位于病毒包膜的內膜中，代表進行ASF檢測和監測的血清學候選物。國內外對于ASFV p54蛋白表位的研究并不是非常完善，Petrovan等人制備了針對桿狀病毒表達的p54(60-178)大C端的一組12種小鼠單克隆抗體(mAb)，基于這些單抗采用肽掃描技術對p54蛋白大C端抗原表位進行分析，得到65-75aa，93-113aa，118～127aa三個線性B細胞表位區域；雖然P54蛋白編碼序列在不同毒株間具有多態性，但p54的N端在各毒株間相對保守，且含有唯一的半胱氨酸，在病毒形態形成，病毒活力，以及入侵等過程中具有重要作用。然而對于p54蛋白N端的研究鮮有報道。如何獲得合適的靶抗原及其表位，研制快速、簡便、準確的檢測產品，以及研制有效、安全、廣譜、新型ASFV表位疫苗或藥物一直是本領域技術人員所努力解決的技術難題。

發明內容

本發明的目的在于提供非洲豬瘟病毒p54蛋白抗原表位肽。