[發(fā)明專利]抗水母毒素納米抗體COZO32、制備方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011606833.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN112920273B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷長(zhǎng)海;胡適;傅文燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/18
• 分類號(hào): C07K16/18;C12N15/13;C12N15/70;A61K39/395;A61P39/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 趙青

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種針對(duì)水母毒素的的納米抗體、制備方法及應(yīng)用，該納米抗體為VHH抗體，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，通過(guò)親和力分析本發(fā)明的納米抗體具有良好的親和力，通過(guò)小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，預(yù)先注射本發(fā)明納米抗體的抗體保護(hù)組小鼠在注射水母毒素后，無(wú)任何小鼠出現(xiàn)中毒癥狀，連續(xù)觀察一個(gè)月無(wú)毒素致死情況，說(shuō)明本發(fā)明的納米抗體具有優(yōu)良的抗水母毒素的作用，對(duì)水母蜇傷具有優(yōu)良的預(yù)防或治療作用，具備廣闊的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于抗水母蜇傷的納米抗體COZO32、其制備方法及在制備水母毒素制劑方面的用途。

背景技術(shù)

水母(Jelly fish)是水生環(huán)境中重要的浮游生物，是世界上最古老而神秘的生物之一，大約在6.5億年前就已經(jīng)存在于地球上，幾乎分布于所有海域。分類上，包括刺絲胞動(dòng)物缽水母綱、十字水母綱、立方水母綱動(dòng)物；在數(shù)量上，近幾十年水母數(shù)量呈爆發(fā)式增長(zhǎng)，不僅導(dǎo)致海洋生態(tài)系統(tǒng)的破壞，對(duì)海洋漁業(yè)造成災(zāi)難性的損害，而且水母蟄傷事件不斷增多，每年都有成千上萬(wàn)人遭受傷害，成為十分棘手的問(wèn)題。

自20世紀(jì)40年代開始，Pubmed就開始關(guān)注并逐漸報(bào)道了葡萄牙戰(zhàn)艦水母(Portuguese man-of-war)、Irukandji水母、海黃蜂水母(Chironex fleckeri)、沙海蜇(Stomolophus meleagris)以及霞水母(Cyanea capillata)等代表性有毒水母蜇傷的病例、處治以及中毒機(jī)理的相關(guān)研究，基本明確了水母蜇傷后引起全身系統(tǒng)性中毒可以分為局部皮膚癥狀和全身中毒兩大類。局部皮膚癥狀包括劇痛、瘙癢、皮疹、色素沉著等；全身中毒癥狀則由水母蜇傷后出現(xiàn)的嚴(yán)重炎癥反應(yīng)引起，如果長(zhǎng)時(shí)間浸泡于水母毒素中，水母毒素很有可能會(huì)穿透皮膚進(jìn)入血液，進(jìn)一步引起心臟、肝臟、腎臟等體內(nèi)多個(gè)臟器的廣泛損傷導(dǎo)致死亡。

目前尚未有針對(duì)水母蜇傷的治療和預(yù)防性藥物。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，采用基因工程的方法制備水母毒素的技術(shù)已經(jīng)成熟，能夠開展水母毒素的生物合成及并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行抗水母毒素抗體的制備研究。

由于抗體能夠高效、特異地與體內(nèi)和體外的各種抗原蛋白結(jié)合，使得抗體不僅能應(yīng)用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能，還可以應(yīng)用于各種高靈敏的檢測(cè)方法。目前，抗體藥物是生物技術(shù)藥物最重要的組成部分，抗體試劑也是醫(yī)學(xué)診斷和生物學(xué)研究中最常用到的試劑之一。因此，抗體相關(guān)的生物產(chǎn)品具有極高的應(yīng)用前景和商業(yè)價(jià)值。抗體可以通過(guò)多種途徑獲得，例如：動(dòng)物或人的血液、細(xì)胞培養(yǎng)、注射雜交瘤細(xì)胞的鼠的腹水等，但這均需要有效的方法進(jìn)行純化，以獲得具有應(yīng)用價(jià)值的抗體產(chǎn)品。目前最常用的抗體純化方法是利用特殊蛋白質(zhì)與抗體的Fc片段之間的高親和力進(jìn)行親和層析。在進(jìn)行抗體產(chǎn)品的工業(yè)生產(chǎn)的過(guò)程中親和層析是其中最為關(guān)鍵的一步，也是整個(gè)生產(chǎn)中耗費(fèi)最高的部分。

針對(duì)上述問(wèn)題，納米抗體應(yīng)運(yùn)而生，納米抗體是來(lái)源于駱駝科動(dòng)物或軟骨魚的特殊抗體。研究表明，駱駝體內(nèi)存在一種天然缺失輕鏈只含重鏈的抗體，稱為重鏈抗體。克隆重鏈抗體的可變區(qū)可得到只由一個(gè)重鏈可變區(qū)組成的單域抗體，稱為VHH抗體。VHH抗體的晶體直徑僅有2.5nm，長(zhǎng)4nm，因此又被稱為納米抗體。納米抗體的大小只有傳統(tǒng)IgG型抗體的十分之一，是天然存在的可與抗原結(jié)合的最小片段。納米抗體能被單基因編碼，可以很容易的利用微生物進(jìn)行生產(chǎn)，并具有很高的產(chǎn)率。但目前尚未見(jiàn)針對(duì)抗水母蜇傷納米抗體的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，依托上述研究背景，研究抗水母毒素納米抗體COZO32、制備方法和用途，即提供了一種全新的納米抗體、其制備方法和用途。

本發(fā)明的第一方面，提供了納米抗體COZO32，該納米抗體為VHH抗體，具有SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列，編碼該納米抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

納米抗體氨基酸序列(SEQ ID NO.1)如下：