[發明專利]一種快速測定IL-2蛋白藥物和抗CD25抗體藥物的生物學活性方法

有效

• 申請號: 202011606724.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112725409B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 王蘭;段茂芹;于傳飛;張峰;劉春雨;付志浩;王文波;郭莎;郭瀟;黃璟;徐苗;王軍志
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;C12N5/10;C12N15/65;C12N15/867;G01N21/76
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 孟祥斌;李紅偉

1.一種快速測定IL-2蛋白藥物和/或抗CD25抗體藥物的生物學活性方法，所述方法包括：構建穩定表達STAT5報告基因的效應細胞，用IL-2刺激激活報告基因的表達，并用抗CD25抗體藥物阻斷IL-2刺激激活的信號通路，根據測定的報告基因的信號值擬合四參數曲線確定IL-2蛋白藥物及抗CD25抗體藥物的生物學活性，所述穩定表達STAT5報告基因的效應細胞是通過將含有STAT5報告基因的載體轉染C8166細胞，并加入Zencin加壓篩選得到的。

2.一種快速測定IL-2蛋白藥物和/或抗CD25抗體藥物的生物學活性方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1) 構建得到穩定表達STAT5報告基因的效應細胞；

(2) 將IL-2蛋白藥物進行稀釋，稀釋后的IL-2蛋白藥物加至步驟(1)所述的效應細胞中進行孵育；

(3) 將抗CD25抗體藥物樣品進行稀釋，稀釋后的抗體藥物及一定濃度的IL-2蛋白藥物分別轉移至步驟(1)所述的效應細胞中進行孵育；

(4) 加入酶反應底物，根據測定的信號值擬合四參數曲線確定IL-2蛋白藥物及抗CD25抗體藥物的生物學活性；

所述穩定表達STAT5報告基因的效應細胞是通過將含有STAT5報告基因的載體轉染C8166細胞，并加入Zencin加壓篩選得到的。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的稀釋為5倍稀釋。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的稀釋為5倍稀釋。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述載體為pLV-STAT5-PGK-Zencin。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗CD25抗體藥物包括巴利昔抗體藥物、達利珠抗體藥物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述抗CD25抗體藥物為巴利昔抗體藥物。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述IL-2蛋白藥物為重組IL-2蛋白藥物。

9.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用熒光素酶試劑盒檢測化學發光值，根據得到的相對化學發光單位值擬合倒S型四參數曲線。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述相對化學發光單位值是在酶標儀上使用化學發光讀取得到的。

11.權利要求1或2所述的方法在IL-2蛋白藥物和/或抗CD25抗體藥物的質量控制中的應用。