[發明專利]一種間充質干細胞因子凍干用保護劑及其應用

有效

• 申請號: 202011606596.1
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112602704B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 章毅;錢曉文;杜琳琳;吳邦召;張亞萌
• 申請（專利權）人: 上海市干細胞技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 上海宣宜專利代理事務所(普通合伙) 31288
• 代理人: 邢黎華

1.一種間充質干細胞因子凍干用保護劑，其特征在于，包括以下重量份的原料：改性谷朊粉1-5份、十四酸乙酯1-5份、磷酸氫鈣0.5-1份、呋喃酮0.3-0.5份、茶多酚0.1-0.5份；

所述改性谷朊粉的制備過程如下：

(1)向純化水中加入谷朊粉，調節pH至7-7.5后加入谷氨酰胺轉氨酶，在45-50℃水解1-2h；

(2)取步驟(1)的水解液滅菌后加入發酵菌劑進行發酵，將發酵液離心后凍干即得改性谷朊粉。

2.根據權利要求1所述間充質干細胞因子凍干用保護劑，其特征在于，所述谷朊粉和谷氨酰胺轉氨酶的質量比為1：0.15-0.35。

3.根據權利要求1所述間充質干細胞因子凍干用保護劑，其特征在于，所述發酵菌劑為植物乳桿菌，發酵條件為在37℃發酵40h。

4.根據權利要求1所述間充質干細胞因子凍干用保護劑，其特征在于，步驟(1)純化水中谷朊粉的濃度為20-25wt％。

5.如權利要求1至4任一項所述間充質干細胞因子凍干用保護劑的應用，其特征在于，包括以下步驟：

(1)脂肪間充質干細胞的獲?。簩⒎蛛x得到的脂肪組織經酶解后重懸于培養基中進行原代培養，待細胞融合度達到80-90％時進行傳代培養；

(2)收集細胞培養液：在傳代培養細胞融合度為75-85％時更換為無血清的DMEM/F12培養基，饑餓培養18-24h，收集上清，過濾后得到細胞培養液；

(3)將步驟(2)的細胞培養液通過40KD的超濾膜，收集透析液，再將透析液通過2KD的超濾膜，收集截留液，在截留液中加入保護劑后冷凍干燥得到凍干粉。

6.根據權利要求5所述間充質干細胞因子凍干用保護劑的應用，其特征在于，每100mL截留液中添加保護劑10-15g。

7.根據權利要求5所述間充質干細胞因子凍干用保護劑的應用，其特征在于，所述步驟(1)中培養基包括基礎培養基DMEM/F12、以培養基終濃度計的胰島素25-30μg/mL、人血白蛋白40-50μg/mL、谷胱甘肽20-30μg/mL、維生素C 10-15μg/mL、2-巰基乙醇150-200μΜ、蘆薈苷10-15ng/mL。

8.根據權利要求5所述間充質干細胞因子凍干用保護劑的應用，其特征在于，步驟(3)的冷凍干燥過程如下：在常壓下-80℃預冷凍5-8h，將預冷凍后的樣品放入凍干機中于壓強20-40Pa，溫度-40～20℃冷凍干燥20-25h。