[發明專利]一種糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用

在審

• 申請號: 202011606532.1
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112553368A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 曹曉寧;劉思辰;喬治軍;王君杰;宋健;喬月;陳凌;秦慧彬;王海崗
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院農作物品種資源研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/02
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 王峰剛

1.一種糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用，其特征在于，所述糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用包括以下步驟：

步驟一，選擇與糜子優良產量性狀相關的基因或基因簇的保守區域，或是包含有與糜子優良產量性狀相關的基因或基因簇的活性關鍵位點的區域，并依據選取的區域分別設計PCR引物，進行PCR檢測；

所述依據選取的區域分別設計PCR引物，進行PCR檢測，具體為：

對糜子基因組DNA進行提取；

進行糜子基因插入位點左邊界旁鄰序列的擴增和確認，得到糜子基因組定性PCR擴增引物對；

利用TAIL-PCR方法進行PCR擴增；

所述利用TAIL-PCR方法進行PCR擴增的反應體系為：

第一輪反應：總體積15μL，2μL 1×PCR緩沖液，1μL 2mM dNTPs，0.2μL 5U Taq DNA聚合酶，11.8μL滅菌去離子水；

第二輪反應：總體積20μL，2.5μL 1×PCR緩沖液，1μL 2mM dNTPs，0.3μL 5U Taq DNA聚合酶，15.2μL滅菌去離子水和1μL 10倍稀釋的第一輪PCR產物；

第三輪反應：總體積30μL，3μL1×PCR緩沖液，2.5μL 2mM dNTPs，1μL 5U Taq DNA聚合酶，22.5μL滅菌去離子水和1μL 20倍稀釋的第二輪PCR產物；

進行糜子的定性PCR檢測；所述糜子的定性PCR檢測中的定性PCR反應體系為：總體積20μL，2.5μL 1×PCR緩沖液，3μL 2mM dNTPs，0.6μL 5U Taq DNA聚合酶，0.5μL定性引物對，13.4μL滅菌去離子水；反應程序為：85℃，5min；90℃，30s，65℃，30s，70℃，30s，35個循環；70℃，5min；

進行糜子的定量PCR檢測；所述糜子的定量PCR檢測中的定量PCR反應體系為：總體積20μL，2.5μL 1×PCR緩沖液，2μL 2mM dNTPs，0.8μL 5U Taq DNA聚合酶，0.5μL定量引物對，14.2μL滅菌去離子水；反應程序為：95℃，3min；90℃，30s，70℃，30s，82℃，30s，45個循環；65℃，3min；

步驟二，選育高產的糜子品種作為母本，選擇能檢測到目標分子標記的糜子品種作為父本，將選擇的母本與父本進行雜交，得到F1代種子；

步驟三，將F1代種子種植成苗，收獲F2代種子，將F2代種子播種，收獲雜交子代；

步驟四，抽提雜交子代不同生長發育階段的葉片組織中的總DNA及總RNA進行分子鑒定，得到含有所述分子標記的雜交后代；

步驟五，將得到的含有所述分子標記的雜交后代自交多代得到優選的雜交子代；

步驟六，將得到的優選雜交子代通過組織培養的方式進行無性擴繁，得到含有分子標記的優選雜交子代的組培苗；

步驟七，進行組培苗的培育、篩選，并進行性狀鑒定，選取性產量相關性狀鑒定優異的子代作為糜子新品種。

2.如權利要求1所述糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用，其特征在于，步驟一中，所述糜子基因分子標記為dCAPS-7D-SNP1；

所述糜子基因分子標記dCAPS-7D-SNP1為糜子基因組DNA中對應于序列表中序列1的第532位的核苷酸，所述dCAPS-7D-SNP1為A或C。

3.如權利要求1所述糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用，其特征在于，步驟一中，所述依據選取的區域分別設計PCR引物，具體為：所述PCR引物為能與糜子基因組DNA中所述糜子分子標記dCAPS-7D-SNP1上下游特異結合的兩條單鏈DNA。

4.如權利要求1所述糜子基因分子標記在鑒定糜子產量相關性狀中的應用，其特征在于，步驟二中，所述將選擇的母本與父本進行雜交為：通過人工授粉的方式進行母本與父本的雜交。