[發明專利]基于LGALS3剪接變體診斷慢粒急變期的試劑及試劑盒

有效

• 申請號: 202011606498.8
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112522415B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 黃波;趙翠;李書琪;章海斌;劉靜;王小中
• 申請（專利權）人: 南昌大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開了LGALS3的3號內含子保留和/或丟失剪接體LGALS3?R和/或LGALS3?M在制備診斷慢性粒細胞白血病急變期的試劑或含有該診斷試劑的試劑盒中的應用，本發明具有較高的靈敏度和特異性，可以更簡單、準確的及早觀察到慢粒急變期，以便及時采取治療手段，具有較高的臨床應用價值。

技術領域

本發明涉及LGALS3剪接變體作為標志物在診斷慢性粒細胞白血病急變期患者中的應用，以及制備相應的檢測試劑和試劑盒盒中的應用。

背景技術

慢性粒細胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一種起源于多能造血干細胞的惡性增殖性疾病，約占人白血病的20％。研究發現約95％的CML患者存在異常的細胞遺傳學改變，即9號染色體和22號染色體交互易位形成費城染色體(philadelphia，Ph)和Bcr-Abl融合基因。BCR/ABL融合蛋白具有強烈酪氨酸激酶活性，異常激活下游多條信號通路，刺激造血細胞異常增殖和惡性轉化。CML的病程通常分為慢性期、加速期及急變期三個階段，慢性期相對較長且癥狀可控，如不經合理治療疾病會不可避免經加速期進展到急變期，而一旦急變，預后極差。

針對CML急變的診斷，國內外出臺了多套標準。這些標準的診斷指標主要有骨髓/外周血原始細胞計數、細胞克隆演化、脾腫大程度及臨床藥物反應性等(融合基因bcr/abl定量由于對診斷急變不敏感而未被納入)。綜合而言，這些指標均過于依賴CML細胞生物學表型和臨床表現，只在急變發生之后才有一定的診斷價值，而不能在急變前期提供預警，導致臨床上一再錯失最佳治療時機。因此，CML急變早期預警、靶向治療這兩個緊密相連的重要環節都亟待尋求突破。

可變剪接是指選擇性地對前mRNA剪接位點的組合剪接加工，形成不同的成熟mRNA，從而使一個基因產生若干個具有獨特結構和功能的蛋白質異構體的過程。近年來的研究表明，可變剪接與疾病例如癌癥等的發育、分化有關，許多疾病相關基因受可變剪接調控，回顧研究發現，其中CML的特征融合基因Bcr-Abl的異常選擇性可變剪接出現與CML耐藥和急變的發生密切相關。Wnt通路作為轉錄組和蛋白質組多樣性的重要驅動因素，調控基因的突變和可變剪接是導致白血病進展和治療耐藥性的重要因素。

半乳糖凝集素3基因(Galectin-3,LGALS3)屬于凝集素家族一員，參與核酸代謝的多個過程，包括RNA轉錄、前mRNA剪接、分化和降解等。根據前期二代測序結果發現，LGALS3存在可變性剪接體。全長LGALS3-R亞型為1975bp，較短的1322bp是LGALS3-M亞型，這兩種亞型是通過選擇性保留/丟失3號內含子出現可變剪接體。雖然前期一些研究報道證實可變剪接在CML的發生發展過程中扮演重要角色，但尚未有LGALS3可變剪接可能調控前mRNA異常剪接并參與慢粒急變進展的報道，因此，本領域對于慢粒急變的早期、準確和特異性的檢測有迫切的需求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠準確早期預警慢性粒細胞白血病急變期(慢粒急變期)的診斷試劑和診斷試劑盒，以及使用所述試劑或試劑盒預警慢粒急變的方法。

本發明的一個方面在于提供了LGALS3剪接變體用于制備診斷慢性粒細胞白血病急變期的試劑或含有所述診斷試劑的試劑盒中的用途，所述LGALS3剪接變體是LGALS3-R亞型(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和/或LGALS3-M亞型(核苷酸序列如SEQ ID NO.2)。

所述LGALS3-R亞型是LGALS3的3號內含子選擇性保留產生的剪接變體，所述LGALS3-M亞型是LGALS3的3號內含子選擇性丟失產生的剪接變體。

本發明的另一個方面在于：提供了診斷受試者是否處于慢粒急變期的方法，該方法包括至少兩個步驟：(a)測定懷疑處于慢性粒細胞白血病急變期的受試者外周血標本中LGALS3-R亞型和/或LGALS3-M亞型的表達量/結合量；和

(b)根據LGALS3-R亞型和/或LGALS3-M亞型的表達量/結合量，評估該受試者是否處于慢性粒細胞白血病急變期。