[發明專利]一種磷脂型DHA的制備方法

在審

• 申請號: 202011604860.8
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN114686534A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 陸姝歡;余超;周齊;李翔宇;汪志明
• 申請（專利權）人: 嘉必優生物技術（武漢）股份有限公司
• 主分類號: C12P7/6463
• 分類號: C12P7/6463;C12P7/6481;C12P7/6472;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

本發明提供一種磷脂型DHA的制備方法，所述制備方法采用裂殖壺菌發酵，在所述裂殖壺菌發酵過程中，從菌體進入對數生長期至發酵結束期間，控制發酵液中碳源碳濃度為0.10?0.36％，并控制碳氮比為2:1?4:1。本發明提供的制備方法通過在裂殖壺菌發酵過程中，從菌體進入對數生長期開始直至發酵結束，有限制地進行補充碳源和氮源，即控制碳氮比為2:1?4:1，既能提供裂殖壺菌生長的基本能量，又能使得磷脂型油脂合成迅速累積，從而獲得富含磷脂型DHA的油脂制品。

技術領域

本發明涉及藥品保健品領域，尤其涉及一種磷脂型DHA的制備方法。

背景技術

多不飽和脂肪酸的存在形式主要分為甘油三酯型、乙酯型和磷脂型。有證據表明，磷脂型多不飽和脂肪酸在人體內吸收方式為主動吸收，吸收率高于甘油三酯型多不飽和脂肪酸，并遠高于乙酯型多不飽和脂肪酸。

二十二碳六烯酸(DHA)是一種重要的omega-3長鏈多不飽和脂肪酸，是大腦和視網膜組織中細胞膜的組成成分，具有增強視力、促進腦細胞發育及預防高血壓、動脈硬化、心血管疾病等生理功效。因此，提供磷脂型DHA以滿足人們機體所需具有重要意義。

天然的磷脂型DHA主要來源于雞蛋卵黃和南極磷蝦油的富集，但這兩種原料來源不穩定，提取較為麻煩，其補充方式單一。因此，目前采用較多的是通過真菌發酵制得磷脂型DHA。常規的發酵法又分兩種：一種是直接提取微生物油脂中的磷脂型DHA，另一種是采用酯交換的方式。其中，直接提取微生物油脂中的磷脂型DHA自然是更簡便的選擇，但是目前的發酵工藝中，都是以生產甘油三酯型DHA為目的，造成磷脂型DHA含量非常少，難以大量收集。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供一種磷脂型DHA的制備方法，通過對裂殖壺菌發酵的過程控制，使得磷脂型油脂合成迅速累積，從而獲得富含磷脂型DHA的油脂。

本發明提供一種磷脂型DHA的制備方法，采用裂殖壺菌發酵，在所述裂殖壺菌發酵過程中，從菌體進入對數生長期至發酵結束期間，控制發酵液中碳源碳濃度為0.10-0.36％，并控制碳氮比為2:1-4:1。

在裂殖壺菌發酵中，由于裂殖壺菌代謝途徑等因素的影響，會使得代謝產物整體往甘油三酯型產物積累的方向進行，從而使得油脂中磷脂型油脂隨著發酵時間的延長逐漸降低。基于此，傳統的發酵工藝中會根據碳源的消耗速度補加碳源，但這對提高磷脂型DHA的生成基本沒幫助。后來又有研究者提出，索性在發酵結束得到富含甘油酯型DHA的菌體細胞后，再以此為基礎二次添加營養物質進行發酵來提高磷脂型DHA的比例。但是，這樣對磷脂型DHA的產量提高有限，而且在實際工業發酵生產中，延長發酵周期會降低細胞活力，過多的補料操作也會增加染菌風險。

本發明研究發現，通過在裂殖壺菌發酵過程中，從菌體進入對數生長期開始直至發酵結束，有限制地進行補充碳源和氮源，即控制碳氮比為2:1-4:1，既能提供裂殖壺菌生長的基本能量，又能使得磷脂型油脂合成迅速累積，并且抑制磷脂型油脂的消耗，從而獲得富含磷脂型DHA的油脂制品。

需要注意的是，本發明所述碳氮比為有機物中碳的總含量與氮的總含量的比值。本發明中所述菌體進入對數生長期的標志為初始培養基中的碳源量接近0，一般在發酵2-5h后。

具體地，所述裂殖壺菌發酵過程中，在菌體進入對數生長期后，根據發酵液中的殘余碳源碳濃度，采用連續補料的方式補加碳源使碳源碳濃度為0.10-0.36％，然后按照所述碳氮比進行氮源的補充。

優選地，所述碳源為葡萄糖、甘油或其酯、糖蜜中的一種或多種；所述補充的氮源為氨水、氨基酸或其鹽、磷酸氫二銨、硝酸銨、硫酸銨、尿素中的一種或多種。其中氨基酸包括谷氨酸、脯氨酸、賴氨酸或丙氨酸。

更優選地，所述補充的氮源中包含至少0.05g/L(以發酵液體積計)的脯氨酸和/或至少0.03g/L(以發酵液體積計)的谷氨酸或其鹽。