[發明專利]一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的引物組、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202011604528.1
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112695110A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 周素娟;何納;丁盈盈;劉星;梁欣悅
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6848;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的引物組，其特征在于，包括檢測引物Ft與檢測引物Bt，

檢測引物Ft為Ft-spn或Ft-cps，Ft-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Ft-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，

檢測引物Bt為Bt-spn或Bt-cps，Bt-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，Bt-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

當檢測引物Ft選擇Ft-spn時，檢測引物Bt選擇Bt-spn，當檢測引物Ft選擇Ft-cps時，檢測引物Bt選擇Bt-cps。

2.根據權利要求1所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的引物組，其特征在于，還包括加速引物IF，加速引物IF為IF-spn或IF-cps，IF-spn的核苷酸序列如SEQID NO.3所示，IF-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

當檢測引物Ft選擇Ft-spn，檢測引物Bt選擇Bt-spn時，加速引物IF選擇IF-spn；

當檢測引物Ft選擇Ft-cps，檢測引物Bt選擇Bt-cps時，加速引物IF選擇IF-cps。

3.一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，包括檢測引物Ft與檢測引物Bt，檢測引物Ft為Ft-spn或Ft-cps，Ft-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Ft-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，檢測引物Bt為Bt-spn或Bt-cps，Bt-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，Bt-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；當檢測引物Ft選擇Ft-spn時，檢測引物Bt選擇Bt-spn，當檢測引物Ft選擇Ft-cps時，檢測引物Bt選擇Bt-cps。

4.根據權利要求3所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，檢測引物Ft與檢測引物Bt的濃度均為40μM。

5.根據權利要求3所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，還包括加速引物IF，加速引物IF為IF-spn或IF-cps，IF-spn的核苷酸序列如SEQID NO.3所示，IF-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；當檢測引物Ft選擇Ft-spn，檢測引物Bt選擇Bt-spn時，加速引物IF選擇IF-spn；當檢測引物Ft選擇Ft-cps，檢測引物Bt選擇Bt-cps時，加速引物IF選擇IF-cps。

6.根據權利要求5所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，加速引物IF的濃度為20μM。

7.根據權利要求3或5所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，還包括如下組分：

A、10×Isothermal Amplification Buffer，100mM的MgSO₄，10mM dNTP Mix，

B、Bst DNA聚合酶；

C、SYBR Green I溶液。

8.根據權利要求7所述的一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒，其特征在于，所述Bst DNA聚合酶為濃度為8U/μL的Bst DNA聚合酶水溶液；

所述SYBR Green I溶液的濃度比為2000×。

9.權利要求1或2所述聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的引物組或權利要求3或5所述聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的試劑盒在檢測樣品中肺炎鏈球菌核酸上的應用。

10.一種聚合酶螺旋反應快速檢測肺炎鏈球菌核酸的方法，其特征在于，利用檢測引物Ft與檢測引物Bt，推薦加入加速引物IF，進行聚合酶螺旋等溫擴增反應，檢測待檢樣品中的肺炎鏈球菌核酸，檢測引物Ft為Ft-spn或Ft-cps，Ft-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Ft-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，檢測引物Bt為Bt-spn或Bt-cps，Bt-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，Bt-cps的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，加速引物IF為IF-spn或IF-cps，IF-spn的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，IF-cps的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；當檢測引物Ft選擇Ft-spn時，檢測引物Bt選擇Bt-spn，加速引物IF選擇IF-spn，當檢測引物Ft選擇Ft-cps時，檢測引物Bt選擇Bt-cps，加速引物IF選擇IF-cps。