[發明專利]檢測目標抗體的多肽的篩選方法及其篩選的多肽的應用

在審

• 申請號: 202011602779.6
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112611875A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 程懇;劉穎;貢卓琳;郭寶森;鄭漢城;李丹妮;勾洪磊;孟星宇
• 申請（專利權）人: 珠海碳云智能科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N33/569
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 路秀麗

1.一種檢測目標抗體的多肽的篩選方法，其特征在于，所述篩選方法包括：

采用多肽芯片技術對目標抗體進行檢測，得到與所述目標抗體具有特異性結合潛能的第一肽段集；

利用含有所述目標抗體的陽性樣本和不含所述目標抗體的陰性樣本，對所述第一肽段集中的多肽進行驗證，從而篩選出能夠檢測所述目標抗體的多肽。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，采用多肽芯片技術對目標抗體進行檢測，得到與所述目標抗體具有特異性結合潛能的第一肽段集包括：

將包含所述目標抗體的樣本進行多個濃度稀釋，得到多個不同濃度的待篩選樣本；

利用多肽芯片技術對多個不同濃度的所述待篩選樣本進行檢測，從而得到不同濃度下與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合，記為所述第一肽段集；

優選地，包含所述目標抗體的樣本包括：包含所述目標抗體的血清樣本和包含所述目標抗體的緩沖液樣本；

優選地，在將包含所述目標抗體的樣本進行多個濃度稀釋之前，所述篩選方法還包括：確定所欲稀釋的多個濃度的范圍；更優選地，通過利用多個不同稀釋濃度的包含所述目標抗體的緩沖液樣本進行多肽芯片檢測得到。

3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，采用多肽芯片技術對目標抗體進行檢測，得到與所述目標抗體具有特異性結合潛能的第一肽段集包括：

將多肽芯片與包含所述目標抗體的樣本進行共孵育，得到第一孵育產物；

將所述第一孵育產物與帶熒光標記的二抗進行共孵育，得到與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合；

按照所述結合信號強度的大小對所述多肽集合中的多肽進行排序，并選取所述結合信號強度較大的前第一預定數量的所述多肽作為所述第一肽段集；

優選地，包含所述目標抗體的樣本包括：包含所述目標抗體的血清樣本和包含所述目標抗體的緩沖液樣本。

4.根據權利要求2所述的篩選方法，其特征在于，利用多肽芯片技術對多個不同濃度的所述待篩選樣本進行檢測，從而得到不同濃度下與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合，記為所述第一肽段集包括：

將多肽芯片分別與不同濃度的所述待篩選樣本進行共孵育，得到多個第一孵育產物；

將所述多個第一孵育產物分別與帶熒光標記的二抗進行共孵育，然后通過圖像采集技術進行檢測，得到與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合；

按照所述結合信號強度由強到弱對所述多肽集合中的多肽進行排序；

選取排名靠前的第二預定數量的所述多肽作為所述第一肽段集。

5.根據權利要求4所述的篩選方法，其特征在于，按照所述結合信號強度由強到弱對所述多肽集合中的多肽進行排序包括：

計算每個濃度下，與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合中的每種多肽序列對應特征的信號強度值，并按照所述信號強度值由大到小進行排序；

優選地，利用多肽芯片對各個濃度的所述待篩選樣本重復檢測多次，計算每個濃度下，與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合中的每種多肽序列對應特征的信號強度的均值或中位值，并按照所述均值或中位值由大到小進行排序；

更優選地，對每個濃度下，與所述目標抗體具有不同結合信號強度的多肽集合中的每種所述多肽對應特征的信號強度值進行對數值轉換，優選為log10轉換，并按照轉換之后的對數值的均值或中位值由大到小進行排序。

6.根據權利要求4所述的篩選方法，其特征在于，選取排名靠前的第二預定數量的所述多肽作為所述第一肽段集包括：

選擇在設定比例的濃度范圍中，優選在所有濃度范圍中，在每一種濃度下重復多次多肽芯片檢測獲得結果的均值或中位值的排序均在前第三預定數量的多肽作為第一候選集；

從所述第一候選集中去除在空白對照和/或陰性樣本的在每一種濃度下重復多次多肽芯片檢測結果的均值或中位值的排序均在前第四預定數量的多肽，得到第二候選集；

獲得所述第二候選集中每條多肽在每一種濃度下重復多次多肽芯片檢測獲得結果的均值或中位值；

根據所述均值或所述中位值，對所述第二候選集中的每條多肽進行排序，挑選排名在前第二預定數量的多肽，作為所述第一肽段集。