[發明專利]C/EBPα和CD68作為預后標記物在制備肝癌預后預測試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202011602522.0
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112698035A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 鄭利民;陳敏山;王永春;許靜;周仲國
• 申請（專利權）人: 中山大學腫瘤防治中心（中山大學附屬腫瘤醫院;中山大學腫瘤研究所）
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了C/EBPα和CD68作為預后標記物在制備肝癌預后預測試劑盒中的應用。本發明研究表明，可通過C/EBPα和CD68在組織原位的共定位情況來判斷單核/巨噬細胞在肝癌組織原位的分化和成熟狀態，以確定肝癌患者組織原位免疫反應情況，幫助臨床醫生更好的判斷患者的預后生存情況，為選擇合適的個體化治療提供免疫學理論基礎。本發明還提供一種用于檢測肝癌組織中單核/巨噬細胞分化成熟度的雙抗體聯合的熒光檢測試劑盒的應用，包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體為C/EBPα和CD68的抗體的組合，所述第二抗體是熒光標記的第二抗體。

技術領域

本發明涉及疾病預后診斷技術領域，具體地，涉及C/EBPα和CD68作為預后標記物在制備肝癌預后預測試劑盒中的應用。

背景技術

肝癌是我國最常見和預后最差的惡性腫瘤之一，絕大多數起病于長期的慢性炎癥。不論肝癌的發生起源于何種誘因，均能導致免疫反應的失衡，大量的免疫細胞連同其產生的細胞因子和代謝產物使肝實質細胞發生基因突變和表觀遺傳學水平的改變，逐步演變成惡性腫瘤細胞。單核/巨噬細胞是其中數量最多的白細胞之一，對肝癌的發生、進展和轉歸均起著非常重要的調節作用。單核/巨噬細胞既是效應細胞又是抗原遞呈細胞，在正常組織及腫瘤發生的早期，能及時、有效地清除衰老和突變的細胞，防止細胞惡性轉化的發生；但在多數已形成的腫瘤中，單核/巨噬細胞受腫瘤微環境的“教育”和影響，可極化出促腫瘤的表型/功能。因此在許多實體腫瘤中，單核/巨噬細胞的浸潤程度與腫瘤的預后呈顯著負相關關系。

近年來的研究表明，在包括肝臟在內的多種器官和組織中的巨噬細胞多起源于胚胎時期的卵黃囊和胎肝，這駐留在組織當中的巨噬細胞能夠通過低水平的自我增殖、自我更新以維持數量的平衡。在疾病發生，如腫瘤存在的情況下，組織微環境可以通過上調巨噬細胞的增殖水平以補充足夠的巨噬細胞數量。盡管如此，外周血來源的單核細胞仍然是組織巨噬細胞的重要補充，參與對疾病進程的調控。我們先前的研究顯示在肝癌的侵襲前緣部位聚集有大量活化的單核細胞，這些單核細胞可通過多種機制促進腫瘤進展。然而，對于這些單核細胞，其分化命運、分化程度，與功能表型的關系，以及腫瘤如何參與這些過程的具體機制尚不清楚。目前為止，尚沒有相關技術或指標能反映單核/巨噬細胞在肝癌組織原位的分化、成熟和增殖情況。

C/EBPα是C/EBPs家族中最早被發現克隆和研究的基因，在肝臟組織中豐富表達。近年來研究表明，C/EBPα參與肝細胞的增殖和分化，參與慢性肝炎、肝纖維化、肝癌發生等病理過程。鄭潔等研究表明C/EBPα基因低表達或失活參與肝癌的發展過程，C/EBPα基因表達水平有可能作為一項預測肝癌進展和預后的指標(鄭潔,魏志新,王寶松,姜棟棟,趙金嶺,于樹娜,蔣吉英.C/EBPα在肝細胞癌中的表達及意義[J].中國組織化學與細胞化學雜志,2010,19(06):593-596.)。

CD68是一種相對分子質量為110 000的細胞漿糖蛋白，與溶酶體顆粒有關，是巨噬細胞標記的一種。CD68表達于以下細胞中：單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、嗜堿性粒細胞、大淋巴細胞、破骨細胞、肥大細胞、滑膜細胞、朗格漢斯巨細胞、樹突狀網織細胞肉瘤和黑色素瘤。此抗體可用于真性組織細胞淋巴瘤、AML、粒細胞肉瘤、Kikucki病中漿樣單核細胞和肥大細胞增多癥的診斷。目前還未見有將C/EBPα和CD68用于反映單核/巨噬細胞在肝癌組織原位的分化和成熟狀態，以用于肝癌患者預后生存期預測的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述缺陷和不足，提供C/EBPα和CD68在制備檢測肝癌組織中單核/巨噬細胞分化成熟度的試劑盒中的應用。

本發明的第二個目的在于提供C/EBPα和CD68作為預后標記物在制備肝癌預后預測試劑盒中的應用。

本發明的第三個目的在于提供一種用于檢測肝癌組織中單核/巨噬細胞分化成熟度的雙抗體聯合的熒光檢測試劑盒。

本發明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的：